Minicircle DNA (mcDNA) เป็นเวกเตอร์ DNA ที่ไม่ใช่ไวรัสขนาดเล็กที่ได้มาจากโครงสร้างคล้ายพลาสมิด DNA ของผู้ปกครอง Minicircle DNA แตกต่างจากพลาสมิด DNA ทั่วไปตรงที่ประกอบด้วยโปรโมเตอร์และยีนที่น่าสนใจ (GOI) โดยไม่มีต้นกำเนิดของการจำลองแบบ (ORI) และเครื่องหมายการคัดเลือก (selMark) DNA ขนาดเล็กของวงกลมถูกสร้างขึ้นในแบคทีเรียผ่านการรวมตัวกันใหม่ของสิ่งมีชีวิตเพื่อกำจัดลำดับพิเศษ (เรียกว่า mini-plasmid) ออกจากพลาสมิด DNA เนื่องจากความปลอดภัย DNA ขนาดเล็กจึงได้รับความนิยมในฐานะเวกเตอร์ที่ไม่ใช่ไวรัสสำหรับการบำบัดด้วยยีน วัคซีน DNA ฯลฯ
รูปที่ 1 โครงสร้างของพลาสมิด DNA (pDNA) และ Minicircle DNA (mcDNA)
ระบบการรวมตัวใหม่ของ DNA ขนาดเล็ก
มี DNA วงกลมขนาดเล็กสี่วงหลัก ในระบบการรวมตัวกันใหม่ของสิ่งมีชีวิต ที่ได้รับการศึกษา รวมถึง Phage λ integrase, Phage P1 Cre recombinase, ParA resolvase, PhiC31 integra se/I-SceI
กลยุทธ์
|
ฟาจ แล อินทิเกรส
|
ฟาจ P1 Cre รีคอมบิเนส
|
พารามีมติ
|
จำนวนเต็ม PhiC31 se/I-SceI
|
กลไก
|
Tyrosine recombinase ซึ่งทำงานผ่านโปรตีน FIS และ IHF เพื่อกระตุ้นการรวมตัวกันใหม่ของไซต์ att hybrid
|
ไทโรซีนรีคอมบิเนสเฉพาะไซต์ ซึ่งดำเนินการรวมตัวกันใหม่แบบสองทิศทางเมื่อเชื่อมโยงกับไซต์ loxP
|
Serine recombinase ซึ่งดำเนินการรวมตัวใหม่ที่ไม่สามารถย้อนกลับได้และเป็นทิศทางเดียวระหว่าง MRSsites สองแห่งที่เหมือนกัน
|
Serine recombinase ซึ่งเป็นสื่อกลางในการรวมตัวกันใหม่ในทิศทางเดียวระหว่างไซต์ที่มีผลผูกพัน attP/attB ในขณะที่ I-SceI endonuclease จะแยกสิ่งเจือปนที่เกี่ยวข้องกับผลิตภัณฑ์และพลาสมิดของผู้ปกครองที่ไม่ได้รวมตัวกันใหม่
|
คุณสมบัติ
|
ขึ้นอยู่กับการแสดงออกของปัจจัยโฮสต์ FIS และ IHF; ความเป็นพิษที่แท้จริง พลาสมิดของผู้ปกครองที่เหลือและมินิพลาสมิด
|
พลาสมิดของผู้ปกครองที่เหลือและมินิพลาสมิด
|
ผลผลิตสูง พลาสมิดของผู้ปกครองที่เหลือและมินิพลาสมิด
|
การเสื่อมสลายของพลาสมิดของผู้ปกครองสัมพันธ์กับผลผลิตที่ลดลง
|
Yaohai Bio-Pharma นำเสนอโซลูชัน CDMO แบบครบวงจรสำหรับ DNA Minicircle
อ้างอิง:
(1) อัลเมดา (AM), เคยรอซ เจเอ, ซูซ่า เอฟ, ซูซ่า Minicircle DNA: อนาคตของเวกเตอร์ที่ใช้ DNA? เทรนด์ไบโอเทคโนโลยี 2020 ต.ค.;38(10):1047-1051. ดอย: 10.1016/j.tibtech.2020.04.008.