mRNA ที่ขยายตัวเอง (saRNA) หรือที่เรียกว่า replicon RNA เข้ารหัสลำดับ mRNA ของการถอดรหัสในหลอดทดลอง (IVT) และยีนจำลองแบบของไวรัสที่ได้มาจากไวรัสอัลฟ่าหรือฟลาวิไวรัส ยีนการจำลองแบบของไวรัสอนุญาตให้มีการขยาย mRNA ได้เอง ซึ่งส่งผลให้มีการแสดงออกของโปรตีนเพิ่มขึ้นและปริมาณ RNA ที่ต้องการขั้นต่ำเมื่อเปรียบเทียบกับ mRNA ที่ไม่ขยาย อีกประการหนึ่งคือ saRNA เป็นโมเลกุลที่ค่อนข้างใหญ่ (มากกว่า 14 kb)
Yaohai Bio-Pharma ได้สร้างชุดเทคโนโลยีการสังเคราะห์ mRNA เพื่อสร้าง mRNA แบบไม่ขยายและ mRNA ที่ขยายได้เอง (1000 nt~14000 nt) เช่น การออกแบบลำดับและการเพิ่มประสิทธิภาพ การทำ IVT การทำให้บริสุทธิ์ การไลโอฟิไลเซชัน และการห่อหุ้มอนุภาคนาโนไขมัน (LNP) . ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดได้รับการเผยแพร่ภายใต้มาตรฐานการควบคุมคุณภาพที่เข้มงวด
รูปที่ 1 คุณสมบัติโครงสร้างของ IVT mRNA: mRNA แบบธรรมดา แบบวงกลม และแบบขยายตัวเอง
RNA ที่ขยายตัวเองประกอบด้วยโปรตีนที่ไม่ใช่โครงสร้างสี่ชนิด (กำหนดเป็น nsP1, nsP2, nsP3 และ nsP4) ซึ่งได้มาจากอัลฟาไวรัส, ไวรัสไข้สมองอักเสบม้าเวเนซุเอลา (VEEV) ในบรรดาสิ่งเหล่านี้ nsP1 แสดงกิจกรรมของเอนไซม์คู่ ได้แก่ GTase และ N7MTase ในขณะที่ nsP2 มีกิจกรรม RTPase ซึ่งเป็นส่วนสำคัญในการกำหนด IVT mRNA เพื่อสร้างโครงสร้าง Cap 0 นอกจากนี้ nsP2 ยังทำหน้าที่เป็นโปรตีเอสและเฮลิเคส ซึ่งอำนวยความสะดวกในการประมวลผลที่ซับซ้อนของ nsP เชิงซ้อนทั้งหมด การทำงานที่แม่นยำของ nsP3 ยังคงเป็นเรื่องที่เข้าใจยาก แต่มันเกี่ยวข้องกับการโต้ตอบกับโปรตีนเซลล์เจ้าบ้านที่หลากหลาย ซึ่งส่งผลให้การตอบสนองของไวรัสที่โฮสต์นั้นลดน้อยลง
ภูมิภาคโปรโมเตอร์ซับจีโนมอัลฟ่าไวรัส (SGP) ตั้งอยู่ก่อนยีนที่น่าสนใจ (GOI) องค์ประกอบ SGP ช่วยให้เริ่มต้นการถอดรหัส GOI ได้ง่ายขึ้นโดยเลี่ยงการอ่านลำดับการเข้ารหัสโปรตีน nsP ของไวรัส
รูปที่ 2 การสังเคราะห์และการตรวจวิเคราะห์เซลล์ของ eGFP saRNA ของแพลตฟอร์ม Yaohai Bio-Pharma RNASci
โปรโตคอลการสังเคราะห์ของ saRNA คล้ายกับ mRNA: การสังเคราะห์ mRNA แบบกำหนดเอง