ในกระบวนการเตรียม mRNA โดยวิธีการทรานสคริปชันในหลอดทดลอง (IVT) พลาสมิด DNA ที่ถูกไลนีย์ไว้จะถูกใช้เป็นเทมเพลตสำหรับการทรานสคริปชัน IVT โดยความช่วยเหลือของเอนไซม์ T7 RNA polymerase การมีพลาสมิด DNA ที่มีคุณภาพสูงเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการทรานสคริปชันในหลอดทดลอง
ด้วยแพลตฟอร์มบริการเตรียมพลาสมิดที่พัฒนาอย่างเต็มที่ ยาห์ไฮ ไบโอ-ฟาร์มา สามารถให้บริการเตรียมพลาสมิด DNA ที่ไลนีย์แล้ว มีความบริสุทธิ์สูงและมาตรฐานสูง เพื่อให้เกิดการทรานสคริปชัน IVT ที่มีประสิทธิภาพ
กระบวนการ | บริการเพิ่มเติม | รายละเอียดบริการ | ระยะเวลาส่งมอบ (วันทำงาน) |
การเตรียมพลาสมิดวงกลม | การสังเคราะห์ยีน | การสังเคราะห์ยีน (จากบุคคลที่สาม) | 7-10 |
การเพิ่มปริมาณพลาสมิด | การเพิ่มปริมาณพลาสมิด | 2 | |
การสกัดพลาสมิด | |||
การเตรียมพลาสมิดเชิงเส้น | การทำให้พลาสมิดเป็นเส้นตรงและการฟอกแยก | การแปลงพลาสมิดให้เป็นเส้นตรง | 1 |
การฟอกแยกดีเอ็นเอเชิงเส้น | |||
การควบคุมคุณภาพดีเอ็นเอพลาสมิด | ความเข้มข้นและความบริสุทธิ์ | การวัดด้วยเครื่อง Spectrophotometry รังสีอัลตราไวโอเลต (UV) | 1-2 |
รูปแบบ Plasmid | การแยกไฟฟ้าเจลอะแกโรส (AGE) | ||
การแยกแบบแคปิลารี (CE)-ตัวเลือก | |||
ระบุพลาสมิด | ระบุเอนไซม์จำกัด/ AGE |
การเลือกวิธีการทำให้เป็นเส้นได้อย่างยืดหยุ่น
การปรับปรุงวิธีการสกัดและการทำให้บริสุทธิ์ของ DNA เพื่อให้ได้อัตราการกู้คืนสูง
มาตรฐานการควบคุมกระบวนการที่เข้มงวด อัตราการคอนฟอร์มซูเปอร์ฮีลิกซ์ของตัวอย่างพลาสมิดสำหรับการวิจัยมากกว่า 80%.
บริการเตรียมพลาสมิดและควบคุมคุณภาพที่มีมาตรฐานสูงและมีประสิทธิภาพสูงเพื่อตอบสนองความต้องการของการทดลอง
โดยใช้ผลิตภัณฑ์ mRNA_luciferase จาก Yaohai Bio-Pharma เป็นตัวอย่าง เทมเพลตพลาสมิดสำหรับการถอดแบบ (เกรดวิจัย) มีอัตราส่วนซูเปอร์ฮีลิกซ์มากกว่า 90% อัตราส่วนการไลนียามากกว่า 100% และอัตราส่วนการถอดแบบในขั้นตอนถัดไปสูงถึง 1:200 (DNA พลาสมิดที่ไลนียา:mRNA).
MRNA_luciferase ที่ได้รับจากการเตรียมพลาสมิดเชิงเส้นเป็นเทมเพลตถูกส่งผ่านเข้าไปในเซลล์ 293T และกิจกรรมของปฏิกิริยาระหว่างเอนไซม์และสารย่อยจะถูกประเมิน 24 ชั่วโมงหลังจากการส่งผ่าน
สามารถตรวจพบสัญญาณกิจกรรม luciferase ที่ชัดเจนและแรงได้ ซึ่งหมายความว่าโปรตีน luciferase ถูกแสดงออกอย่างมีประสิทธิภาพ โดยบ่งบอกว่าความบริสุทธิ์ของเทมเพลตการทรานสคริปชันสามารถตอบสนองความต้องการของการเตรียม mRNA คุณภาพสูงได้อย่างเต็มที่
การทดสอบอัตราส่วนพลาสมิดซูเปอร์คอยล์
การตรวจสอบการแสดงออกของ mRNA Luciferase ใน Vitro