MRNA วงกลม (circRNA) ได้รับการใช้งานอย่างแพร่หลายในการศึกษาฟังก์ชันของยีนหรือโปรตีน นอกจากนี้ยังเป็นที่นิยมในกระบวนการพัฒนาชีวเภสัชภัณฑ์เพื่อการป้องกันและการรักษา เช่นเดียวกับ mRNA
Yaohai Bio-Pharma ได้พัฒนาเทคโนโลยีการสังเคราะห์ circRNA ชุดหนึ่งเพื่อให้บริการ RNA คุณภาพสูง เช่น การออกแบบและปรับแต่งลำดับเบส การถอดรหัสในหลอดทดลอง (IVT) การสร้างวงกลม การกรอง และการห่อหุ้มด้วยอนุภาคไขมันขนาดนาโน (LNP) ทั้งหมดนี้ดำเนินการภายใต้มาตรฐานการควบคุมคุณภาพ (QC) ที่เข้มงวด
เมื่อเปรียบเทียบกับ mRNA แบบเส้นตรง RNA แบบวงกลม (circRNA) มีความเสถียรมากกว่าในด้านโครงสร้าง และเป็นจุดสนใจสำคัญในงานวิจัยยาสารพันธุกรรมในปัจจุบัน โดยมีการประยุกต์ใช้งานอย่างหลากหลายในสาขาต่าง ๆ ไม่ว่าจะเป็น circRNA แบบเข้ารหัสหรือไม่เข้ารหัส เช่น วัคซีนป้องกันโรคติดเชื้อ วัคซีนบำบัดสำหรับโรคมะเร็ง ยาบำบัดสำหรับโรคมะเร็ง การแทนที่โปรตีน การแพทย์ฟื้นฟู เซลล์และยีนบำบัด (CGT) บทบาทของโมเลกุลฟองน้ำ และ RNA aptamer
กระบวนการ | บริการเพิ่มเติม | รายละเอียดบริการ | ระยะเวลาส่งมอบ (วัน) |
การออกแบบและปรับแต่งลำดับ circRNA | การออกแบบและปรับแต่งลำดับรหัสพันธุกรรม | การปรับแต่งโคโดนของ CDS | 1 |
การออกแบบและปรับแต่งลำดับที่ไม่ใช้รหัสพันธุกรรม | การออกแบบและปรับแต่งลำดับอินแทรอนและเอ็กซอน อาร์มโฮมโลจัส และสเปเซอร์ | 1-2 | |
การเตรียมพลาสมิดวงกลม | การสังเคราะห์ยีน | การสังเคราะห์ยีน (จากบุคคลที่สาม) | 7-10 |
การเพิ่มปริมาณพลาสมิด | การเพิ่มปริมาณพลาสมิด | 2 | |
การสกัดพลาสมิด | |||
การเตรียมพลาสมิดเชิงเส้น | การทำให้พลาสมิดเป็นเส้นตรงและการฟอกแยก | การแปลงพลาสมิดให้เป็นเส้นตรง | 1 |
การฟอกแยกดีเอ็นเอเชิงเส้น | |||
การถอดแบบดีเอ็นเอในหลอดทดลองและการหมุนเวียน | การถอดแบบดีเอ็นเอในหลอดทดลองและการหมุนเวียน | ปฏิกิริยาการถอดแบบดีเอ็นเอในหลอดทดลองและการหมุนเวียน | 1-2 |
การย่อยด้วย RNase R | |||
การเพิ่มประสิทธิภาพ - ตัวเลือก | องค์ประกอบของปฏิกิริยา การเพิ่มประสิทธิภาพเวลา | 2-5 | |
การกรอง circRNA | วิธีการฟอกแบบปกติ | การตกตะกอนด้วยลิเธียมคลอไรด์ | 1 |
การแยกด้วยเม็ดแม่เหล็ก | 1 | ||
การแยก circRNA ที่บริสุทธิ์สูง | โครมาโตกราฟีของเหลวความเร็วสูงสำหรับการเตรียมตัวอย่าง (HPLC) | 1-2 | |
การเปลี่ยนบัฟเฟอร์ | การกรองสูง | 1 | |
การอบแห้ง circRNA | การเติมตัวอย่าง | การเติม | 2-3 |
การไลโอไฟล์ | การแช่แข็งล่วงหน้า | ||
การอบแห้งขั้นแรก (การ sublime) | |||
การอบแห้งขั้นที่สอง (การดูดซับ) | |||
การห่อหุ้ม circRNA-LNP | การห่อหุ้มด้วย LNP | การเตรียมวัสดุและของเหลว | 2 |
การผสมด้วยอุปกรณ์ Microfluidic | |||
การเปลี่ยนบัฟเฟอร์ | การกรองแบบ Tangential Flow | 1 | |
ฆ่าเชื้อ | การกรอง | ||
การควบคุมคุณภาพของพลาสมิด DNA | ความเข้มข้น/ความบริสุทธิ์ | การวัดด้วยเครื่อง Spectrophotometry รังสีอัลตราไวโอเลต (UV) | 1-2 |
รูปแบบ Plasmid | การแยกไฟฟ้าเจลอะแกโรส (AGE) | ||
การแยกแบบแคปิลารี (CE)-ตัวเลือก | |||
ระบุพลาสมิด | การระบุเอนไซม์รีสทริกชัน/AGE | ||
การควบคุมคุณภาพของ circRNA | ความเข้มข้น/ความบริสุทธิ์ | การวัดด้วยเครื่อง Spectrophotometry รังสีอัลตราไวโอเลต (UV) | - |
ความบริสุทธิ์ | การแยกด้วยเจลอะไกโรส (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-ตัวเลือก | 1 | ||
การควบคุมคุณภาพของ circRNA-LNP | ประสิทธิภาพการห่อหุ้ม | วิธี RiboGreen | 1 |
ขนาดอนุภาค | การกระจายแสงแบบไดนามิก (DLS) | 1 | |
ดัชนีโพลีดิสเพอร์ซิตี้ | การกระจายแสงแบบไดนามิก (DLS) | 1 | |
ศักย์เซต้า | การกระจายแสงแบบไดนามิก (DLS) | 1 | |
การทดสอบประสิทธิภาพที่ใช้เซลล์ | การถ่ายโอนสารเข้าเซลล์ | การทำแผ่นเซลล์ การถ่ายโอนสารเข้าเซลล์ | 4 |
การตรวจจับโปรตีนเป้าหมาย | การสังเกตการณ์แสงฟลูออเรสเซนต์ เวสเทิร์นบล็อต/ELISA | 1-3 |
เราได้ทำการถ่ายโอน circRNA ของโปรตีนสีเขียวเรืองแสง (eGFP circRNA) mCherry circRNA และ luciferase circRNA เข้าสู่เซลล์ 293T และตรวจจับโปรตีนเป้าหมายผ่านสัญญาณเรืองแสง สัญญาณแสง หรือสี เวสเทิร์นบล็อต (WB) และ ELISA (การตรวจวิเคราะห์แบบเชื่อมโยงเอนไซม์)
การทดสอบประสิทธิภาพที่ใช้เซลล์ของตัวอย่าง circRNA โดย Yaohai Bio-Pharma