เกี่ยวกับการผลิตมวลชนม RNA การถอดรหัสในหลอดทดลอง (IVT) เป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพและสุกงอมากกว่า การทำปฏิกิริยา IVT จะใช้ DNA พลาสมิดที่ตัดเส้นตรงแล้วซึ่งมีโปรตีน T7 เป็นแม่แบบ และ mRNA จะถูกสังเคราะห์โดยใช้ไนโตรไซด์ไตรฟอสเฟต (NTPs) เป็นสารตั้งต้นในความเข้มข้นของโพลิเมอเรส T7 RNA
การแก้ไขโครงสร้างนิวคลีโอไทด์เป็นความก้าวหน้าสำคัญในการศึกษา mRNA โดย mRNA ที่ไม่มีการแก้ไขจะถูกตรวจจับโดยเซนเซอร์ RNA ภายในเซลล์เพื่อกระตุ้นระบบภูมิคุ้มกันตามธรรมชาติ ด้วยเหตุนี้ เมื่อพิจารณาถึงความเป็นภูมิคุ้มกันในร่างกายและการแปลรหายีนของ mRNA กระบวนการ IVT มักจะใช้ NTPs ที่มีการแก้ไขบางประเภท โดยนิวคลีโอไทด์ที่แก้ไขทั่วไปได้แก่ พิวโดยูริดีน (Ψ), N1-เมทิล-พิวโดยูริดีน (N1Ψ) และ 5-เมทิลไซโตซีน (5mC)
แผนภาพปฏิกิริยาการถอดแบบในหลอดทดลอง (IVT)
บริการเพิ่มเติม |
รายละเอียดบริการ |
ระยะเวลาส่งมอบ (วันทำงาน) |
การทรานสคริปต์ในหลอดทดลอง (IVT) |
IVT, การถอดแบบในหลอดทดลอง | 1 |
การแก้ไขนิวคลีโอไทด์ (Ψ/N1Ψ/5mC ฯลฯ) | ||
การกำจัดเทมเพลต DNA (DNase I) | ||
การปรับแต่งเงื่อนไข IVT - ตัวเลือก |
การออกแบบและปรับแต่งองค์ประกอบปฏิกิริยา IVT | 2-5 |
ปรับปรุงความเสถียรของ mRNA และการแสดงออกของโปรตีนในสภาวะใน vivo ได้。
สามารถเตรียมชิ้นส่วน mRNA ได้ยาวถึง 10kb。
โดยการปรับแต่งเงื่อนไขปฏิกิริยา IVT อัตราการทรานสคริปชันจะสูงถึง 1:200
ควบคุม RNase อย่างเข้มงวดผ่านสภาพแวดล้อมการทดลองและอุปกรณ์ที่ใช้สามารถป้องกันการเสื่อมของ mRNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพ
ระบบปฏิกิริยา IVT ในปัจจุบันได้รับการปรับแต่งให้เหมาะสมสำหรับระบบสังเคราะห์ที่มีความยาวประมาณ 100 nt ไม่ใช่สำหรับ mRNA ที่มีความยาวใดๆ ก็ตาม ยิ่งลำดับ mRNA มีความยาวมากเท่าไร การทรานสคริปชันก็จะยิ่งยากขึ้นและมีแนวโน้มที่จะเสื่อมลงมากขึ้น
เพื่อเตรียมลำดับ mRNA ที่ปรับแต่งได้ตามต้องการ โดยมีความยาวประมาณ 10 กิโลเบส ยาโอไฮ ไบโอ-ฟาร์มา ได้ประสบความสำเร็จในการเตรียมตัวอย่างคุณภาพสูงด้วยอัตราการถอดแบบสูง 1:135 และได้รับผลิตภัณฑ์ mRNA ที่ผ่านการกรองขั้นต้น 135 ไมโครกรัม หลังจากการถอดแบบใน vitro จากพลาสมิดเชิงเส้น 1 ไมโครกรัม ผ่านการออกแบบทดลองอย่างเข้มงวด การปรับปรุงเงื่อนไขปฏิกิริยาอย่างต่อเนื่อง และการควบคุม RNase อย่างเคร่งครัด
ระบุ mRNA (การแยกด้วยเจลอะคารอส)