เอนไซม์สำคัญสำหรับการผลิต Long-RNA
mRNA ซึ่งเป็น RNA ชนิดหนึ่งที่มีการเข้ารหัสยาว ทำงานได้อย่างปลอดภัยและมีประสิทธิภาพในวงกว้างของผู้คนในช่วงโควิด-19 RNA ที่ใช้โค้ดยาวอื่นๆ เช่น RNA ที่ขยายตัวเอง (saRNA) และ mRNA แบบวงกลม (circRNA) ยังแสดงให้เห็นประสิทธิภาพในการศึกษาทางคลินิกและก่อนคลินิกอีกด้วย
การผลิต RNA ที่มีการเข้ารหัสยาวขนาดใหญ่นั้นอาศัยการถอดรหัสในหลอดทดลอง (IVT) โดยปฏิกิริยาของเอนไซม์หลายชนิด ขั้นตอนของการผลิต RNA ได้แก่ การเตรียมแม่แบบ DNA, การสังเคราะห์ IVT RNA, การไหลเวียน, การนำ DNA ออก, การดัดแปลง RNA (การปิดฝาและการตัดหาง) และการทำให้ RNA บริสุทธิ์
มีเอนไซม์สำคัญหลายตัวที่ใช้ในการผลิต RNA ที่เข้ารหัสแบบยาว (เช่น mRNA, saRNA และ circRNA) รวมถึงเอ็นไซม์จำกัด, T7 RNA polymerase (T7 RNAP), ตัวยับยั้ง RNase, ไพโรฟอสฟาเตสอนินทรีย์, DNase I, เอนไซม์ vaccinia capping และ RNase R
กระบวนการ
|
เอนไซม์
|
ฟังก์ชัน
|
การเตรียมแม่แบบดีเอ็นเอ
|
ข้อ จำกัด ของเอ็นโดนิวคลีเอส
|
การทำให้เป็นเส้นตรงของพลาสมิด DNA (pDNA) เพื่อหลีกเลี่ยงการสร้างการถอดเสียงที่ยาวขึ้น
|
การสังเคราะห์ IVT RNA
|
T7 RNA โพลีเมอเรส (T7 RNAP)
|
เชื่อมโยงกับโปรโมเตอร์ T7 และสร้างการถอดเสียง RNA เฉพาะ มีบทบาทสำคัญในระหว่างปฏิกิริยา IVT
|
สารยับยั้ง RNase ชนิดรีคอมบิแนนท์
|
ยับยั้งกิจกรรม RNase ระหว่างปฏิกิริยา IVT
|
ไพโรฟอสฟาเตส, อนินทรีย์ (iPPase)
|
ป้องกันไพโรฟอสเฟตระหว่างปฏิกิริยา IVT
|
การกำจัดดีเอ็นเอ
|
ดีเนส ไอ
|
ลบเทมเพลต DNA
|
การปรับเปลี่ยนอาร์เอ็นเอ
|
เอนไซม์ปิดฝาวัคซีน
|
เพิ่มโครงสร้าง Cap1 ที่ปลาย 5 ′ของ IVT mRNA
|
2'-O-เมทิลทรานสเฟอรัส
|
การเสริมคุณค่า circRNA |
อาร์เนส อาร์ |
ย่อย RNA เชิงเส้นและเพิ่มคุณค่า RNA แบบวงกลม |
Yaohai Bio-Pharma นำเสนอโซลูชัน CDMO แบบครบวงจรสำหรับเอนไซม์