Réactif enzymatique

Modalité

Protéases de suppression des balises

Pour améliorer la solubilité et simplifier le processus de purification des protéines recombinantes, les chercheurs ajoutent généralement des étiquettes de fusion, parmi lesquelles l'étiquette His, la protéine liant le maltose (MBP) et la glutathion-S-transférase (GST) sont couramment utilisées.

Bien qu’elle soit étiquetée comme une séquence supplémentaire de protéine, elle doit être supprimée pour maintenir l’activité biologique dans l’industrie pharmaceutique. L'élimination des étiquettes de fusion nécessite des protéases spécifiques au site, telles que l'entérokinase (EK), la thrombine, la protéase du virus de gravure du tabac (TEVp), la protéase 3C du rhinovirus humain (HRV3C), la protéase de la petite protéine modificatrice de l'ubiquitine (SUMO), le virus de la marbrure des veines du tabac ( TVMV) protéase et carboxypeptidase A/B (CPA/CPB).

Type	Enzyme	Site de reconnaissance
Endoprotéases de suppression des balises	Entérokinase (EK), entéropeptidase	DDDDK↓
	Thrombine	LVPR↓GS
	protéase TEV	ENLYFQ↓G
	Protéase HRV3C	LEVLFQ↓GP
	Protéase SUMO	Structure tertiaire SUMO
	Protéase TVMV	ETVRFQG↓S
Exoprotéases de suppression de balises	Carboxypeptidase A (CPA)	Acides aminés C-terminaux, sauf Pro, Lys et Arg
Exoprotéases de suppression de balises	Carboxypeptidase B (CPB)	Lys et Arg C-terminaux

Autres protéases

Application	Enzyme	Fonction
Autres protéases	Protéase K	Une sérine protéase qui digère les protéines en hydrolysant les liaisons peptidiques.
	IdeS, protéase IgG	Enzymes dégradant les IgG (Ides) qui se clivent sur un site spécifique de l'immunoglobuline G (IgG), générant des fragments Fab et Fc
	Protéase IgA1	Enzyme protéolytique qui clive un site spécifique dans la séquence de la région charnière de l'immunoglobuline humaine A1 (IgA1).

Nucléase

Application	Enzyme	Fonction
Nucléase	Nucléase	Clive les acides nucléiques (ADN ou ARN) en hydrolysant les liaisons phosphodiester.
Nucléase	Restreindre l'enzyme	Une endonucléase qui clive l'ADN sur ou à proximité de sites spécifiques.

Amidase

Application	Enzyme	Fonction
Amidase	PNGase F	Clive entre les résidus GlcNAc et asparagine les plus internes des oligosaccharides à haute teneur en mannose, hybrides et complexes.

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