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Criblage des souches

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CDMO microbien

Criblage des souches

L'importance du dépistage des souches

Le dépistage des hôtes appropriés est nécessaire au développement de produits biologiques CMC, qui déterminent la qualité et la cohérence du produit et du processus de fabrication. L’objectif direct du criblage de l’hôte est de fournir une banque de cellules primaires (PCB) candidate, avec des niveaux d’expression élevés et une stabilité élevée à la fois en termes de stabilité de passage et de stabilité de stockage. La sélection d’un hôte approprié est nécessaire pour deux raisons principales :

 - Tout d'abord, sélectionner l'hôte microbien présentant un niveau d'expression élevé. Il existe plusieurs souches disponibles dans le commerce, qui sont utilisées pour exprimer différents types de protéines, comme les protéines toxiques, les protéines solubles ou les protéines eucaryotes. 

 - Deuxièmement, sélectionner l'hôte présentant une stabilité génétique. Les tests de stabilité génétique sont un point clé tout au long du cycle de vie de la production. Il est suggéré qu’une stabilité génétique élevée est reconnue comme une autre caractéristique clé d’une souche appropriée.

Mots clés : sélection de souches microbiennes, criblage de souches microbiennes, criblage à haut débit de bactéries ou de levures, criblage de souches à haute production, criblage de souches hautement stables, criblage de souches génétiquement stables Application : médecine humaine, médecine animale, vaccin, biologie synthétique, grosse molécule recombinante produits biologiques, réactif biologique

Services de criblage de souches de Yaohai Bio-Pharma

Bénéficiant de plus de 10 ans d'expérience CDMO dans le domaine des produits biologiques microbiens, nous soutenons le développement et la fabrication de diverses grosses molécules, notamment des vaccins sous-unitaires recombinants, des particules pseudo-virales (VLP), des hormones (insuline, GLP-1, hormone de croissance), des cytokines ( Interleukine-2/IL-2, IL-15, IL-21), facteurs de croissance(EGF, FGF, NGF), nanocorps/anticorps à domaine unique (sdAbs), enzymes, etc. 

Nous avons accumulé de riches expériences dans la sélection de divers types de vecteurs plasmidiques et d'hôtes microbiens, notamment des bactéries. Escherichia coli (E. coli), et levure Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Nous pouvons trouver le meilleur système d’expression pour vos produits biologiques uniques. 

Nous avons collecté divers hôtes microbiens avec des sources claires et un CoA standard, notamment d'E. coli expression et expression de la levure.

Détails du service

Services

Détails du service

Délai minimum/jour

(produits) livrables

Construction de souches (E. coli)

Transformation plasmidique (multi-hôtes)

5

COA des hôtes commerciaux Rapport de construction de souche

Vérification PCR

Purification des souches

Préservation des souches

Construction de souche (levure)

Préparation de cellules de levure compétentes

10

Linéarisation plasmidique

Transformation électro

Dépistage des résistances/carences nutritionnelles

Purification des souches

Préservation des souches

Sélection d’hôtes appropriés

Extraction d'ADN plasmidique ou génomique

15-20

Processus de sélection de l'hôteCOA de souches modifiées

Vérification PCR, digestion par enzymes de restriction

Séquençage du gène cible

Criblage d'hôtes à haute expression

Criblage d’hôtes présentant une stabilité génétique

Préservation des souches
Étude de cas
Un hôte approprié améliore le niveau d’expression des protéines de 2.5 fois.

Nous sommes chargés de développer des produits de haute production E. coli souche. Et nous avons essayé trois types de publicités E. coli hôtes, en fonction des caractéristiques de la protéine cible. Il est démontré que les souches S1-1 et S1-2 (Fig. A : Piste 1,2, 3.5) ont amélioré le niveau de protéines jusqu'à 3 fois par rapport à la souche initiale du client (Fig. A : Piste XNUMX). 

En outre, la souche S1-1 présentait une stabilité génétique élevée (Fig. B) et elle a été reconnue comme souche candidate pour les banques de cellules primaires (PCB).

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Nos caractéristiques de service

Expertise démontrée avec divers hôtes microbiens, par ex. E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21 ; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, souche PichiaPink1/2/3/4 ; S. cerevisiae et H. polymorphe.

Nous sommes expérimentés avec E. coli la sécrétion périplasmique, l'expression des corps solubles et d'inclusion, ainsi que l'expression intracellulaire ou de sécrétion de levure. Nous n’ajoutons aucun antibiotique ou ajoutons les antibiotiques conformément aux directives réglementaires. 

Nous établissons une plateforme de criblage à haut débit pour cribler des souches stables et hautement productives parmi plus d’une centaine de souches candidates.

Il est garanti que le processus d'ingénierie et de sélection des souches est traçable, dans le cadre de la bonne gestion des données et des enregistrements.

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