Le profilage des N-glycanes est essentiel pour la production de produits biopharmaceutiques. Yaohai Bio-Pharma fournit un service de profilage des N-glycanes par chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS) des glycanes libérés et marqués. Les étapes générales de préparation de l'échantillon de N-glycanes comprennent la digestion de la glycoprotéine (GP), la déglycosylation, la purification, le marquage/dérivatisation et l'extraction en phase solide (SPE).
Nous avons été impliqués dans la caractérisation structurale des protéines de diverses grosses molécules, notamment les vaccins sous-unitaires recombinants, les nanobodies/VHH/anticorps à domaine unique (sdAbs), les fragments d'anticorps, les hormones/peptides, les cytokines, les facteurs de croissance (GF), les enzymes, les collagènes, etc.
Exigences réglementaires pour le profilage des N-glycanes
Selon la directive ICH Q6B, « pour les glycoprotéines, la teneur en glucides (sucres neutres, sucres aminés et acides sialiques) est déterminée. De plus, la structure des chaînes glucidiques, le profil des oligosaccharides (profil d'antenne) et le(s) site(s) de glycosylation de la chaîne polypeptidique sont analysés dans la mesure du possible.
Méthode analytique
| Analyse |
Méthodologie |
| Profilage des N-glycanes |
Analyse par chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS) des glycanes libérés et marqués |
Procédures
1. Libération enzymatique de glycane avec la Peptide N-Glycosidase F (PNGase F)
2. Dérivation des glycanes libérés par le 2-aminobenzamide (2-AB)
3. Purification des N-glycanes récoltés sur une colonne TSK Amide - 80 si de grandes quantités de détergents, de sels non volatils ou de matériaux avec des groupes amino libres sont présents
4. Marquage par 2-aminobenzamide fluorescent (2-AB)
5. Analyse LC-MS des N-glycanes marqués
6. L'analyse des données
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