Synthèse sur mesure de saRNA
L'ARNm autoreplicatif (saRNA), également appelé ARN replicon, encode des séquences d'ARNm obtenu par transcription in vitro (IVT) et des gènes de réplicase virale dérivés des alphavirus ou flavivirus. Les gènes de réplicase virale permettent l'autoreplication de l'ARNm, ce qui entraîne une augmentation de l'expression protéique et une dose minimale d'ARN requise par rapport aux ARNm non amplifiants. Un autre aspect est que le saRNA est une molécule relativement grande (plus de 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma a mis en place un ensemble de technologies de synthèse d'ARNm pour fournir des ARNm non amplifiants et des ARNm autoreplicatifs (1000 nt~14000 nt), tels que la conception et l'optimisation des séquences, la TIV, la purification, la lyophilisation et l'encapsulation dans des nanoparticules lipidiques (LNP). Tous les produits sont libérés selon des normes strictes de contrôle qualité.
Fig. 1 Caractéristiques structurales des ARNm IVT : Conventionnels, Circulaires et ARNm auto-amplifiables.
Caractéristiques séquentielles de l'ARNm auto-amplifiable
L'ARN auto-amplifiable comprend quatre protéines non structurales (désignées comme nsP1, nsP2, nsP3 et nsP4), qui sont dérivées des alphavirus, en particulier du virus vénézuélien de l'encéphalite équine (VEEV). Parmi celles-ci, la nsP1 présente deux activités enzymatiques, à savoir GTase et N7MTase, tandis que la nsP2 possède une activité RTPase, essentielle pour le chapeautage de l'ARNm IVT afin de générer une structure Cap 0. De plus, la nsP2 agit également comme protéase et hélicase, facilitant le traitement complexe de tout le complexe nsP. La fonction précise de la nsP3 reste encore inconnue, mais elle interagit avec diverses protéines cellulaires hôtes, contribuant ainsi à atténuer la réponse antivirale déclenchée par l'hôte.
Une région de promoteur sous-génomique (SGP) des alphavirus est située avant le gène d'intérêt (GOI). L'élément SGP facilite l'initiation de la transcription du GOI en contournant la lecture de la séquence codant les protéines virales nsP.
Fig. 2 Synthèse et essais cellulaires de l'ARN sa eGFP de la plateforme RNASci de Yaohai Bio-Pharma.
Solutions sur mesure d'ARN sa
Le protocole de synthèse de l'ARN sa est similaire à celui de l'ARNm : Synthèse d'ARNm sur mesure
- Conception de la séquence
- Préparation du plasmide modèle
- transcription in vitro (IVT)
- cappage enzymatique de l'ARNm
- cappage co-transcriptionnel de l'ARNm
- purification de l'ARNm
- lyophilisation de l'ARNm
- Encapsulation en LNP
- Analyse et essais
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