Synthèse d'ARNa personnalisée
L'ARNm auto-amplifiant (ARNsa), également connu sous le nom d'ARN réplicon, code pour des séquences d'ARNm de transcription in vitro (IVT) et des gènes de réplicase virale dérivés d'alphavirus ou de flavivirus. Les gènes de réplicase virale permettent l'auto-amplification de l'ARNm, ce qui entraîne une expression accrue des protéines et une dose minimale requise d'ARN par rapport aux ARNm non amplificateurs. Un autre aspect est que le saRNA est une molécule relativement grosse (plus de 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma a mis en place un ensemble de technologies de synthèse d'ARNm pour fournir des ARNm non amplificateurs et des ARNm auto-amplifiants (1000 14000 nt ~ XNUMX XNUMX nt), telles que la conception et l'optimisation de séquences, l'IVT, la purification, la lyophilisation et l'encapsulation de nanoparticules lipidiques (LNP). . Tous les produits sont commercialisés selon des normes de contrôle de qualité strictes.
Fig.1 Caractéristiques structurelles des ARNm IVT : ARNm conventionnel, circulaire et auto-amplifiant.
Caractéristiques de séquence de l'ARNm auto-amplifiant
L'ARN auto-amplificateur comprend quatre protéines non structurales (désignées nsP1, nsP2, nsP3 et nsP4), dérivées des alphavirus, le virus de l'encéphalite équine vénézuélienne (VEEV). Parmi ceux-ci, nsP1 présente des activités enzymatiques doubles, à savoir GTase et N7MTase, tandis que nsP2 possède une activité RTPase, essentielle pour coiffer l'ARNm IVT afin de générer la structure Cap 0. De plus, nsP2 sert de protéase et d’hélicase, facilitant le traitement complexe de l’ensemble du complexe nsP. La fonction précise de nsP3 reste insaisissable, mais elle s'engage dans des interactions avec diverses protéines de la cellule hôte, contribuant ainsi à l'atténuation de la réponse antivirale montée par l'hôte.
Une région du promoteur subgénomique (SGP) de l'alphavirus est située avant le gène d'intérêt (GOI). L'élément SGP facilite l'initiation de la transcription GOI en contournant la lecture de la séquence codant pour les protéines virales nsP.
Fig.2 Synthèse et analyses cellulaires du saRNA eGFP de la plateforme Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Solutions personnalisées de saRNA
Le protocole de synthèse du saRNA est similaire à celui de l’ARNm : Synthèse d'ARNm personnalisée
- Conception de séquence
- Préparation du modèle plasmidique
- transcription in vitro (IVT)
- Coiffage enzymatique de l'ARNm
- Coiffage de la co-transcription de l'ARNm
- Purification de l'ARNm
- Lyophilisation de l'ARNm
- Encapsulation LNP
- Analyse et tests
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