En ce qui concerne la préparation par lots des précurseurs d'ARN, une méthode couramment utilisée est la transcription in vitro (IVT). La réaction IVT utilise un ADN plasmidique linéarisé contenant le promoteur T7 comme modèle et synthétise un précurseur d'ARN avec des triphosphates de nucléosides (NTP) comme substrat en présence de la polymérase RNA T7.
Les méthodes de cyclisation in vitro incluent la ligature chimique, la ligature enzymatique et la méthode d'intron-exon permuté (PIE). La ligature chimique et enzymatique convient à la cyclisation d'ARN plus courts. Lorsque le fragment est supérieur à 100 nt, le taux de cyclisation diminue considérablement. En revanche, la méthode basée sur le système PIE peut réaliser la cyclisation de séquences de 8 kb.
Sous la catalyse du guanosine triphosphate (GTP), la structure PIE subit une cyclisation des séquences extra-introniques. Associée à une stratégie raisonnable pour augmenter le taux de cyclisation, Yaohai Bio-Pharma peut atteindre une cyclisation de séquences allant jusqu'à 4 kb, avec une efficacité de cyclisation supérieure à 80 %.
La réaction de cyclisation in vitro de l'ARN se déroule comme suit :
Le précurseur ARN est synthétisé par transcription in vitro, et le composant PIE termine son autosplicing sous la catalyse du GTP pour former un circRNA.
Détails des Services
| Process |
Détails du service |
Période de livraison (jour ouvrable) |
| Transcription in vitro et circulation |
Confirmation du système de réaction |
1-2 |
| Réactions de transcription in vitro et de cyclisation |
| Digestion par la RNase R |
| Optimisation de la réaction |
Composition de la réaction, optimisation du temps |
2-5 |
Nos fonctionnalités
- Conception Rigoureuse des Tests et Optimisation
Jusqu'à 4 kb d'ARN peuvent être cyclisés.
- Efficacité de cyclisation élevée
Un taux de cyclisation de plus de 80 % peut être atteint grâce à une stratégie d'optimisation séquentielle rationnelle.
- Contrôle strict de la RNase
Grâce à un contrôle strict des RNases dans l'environnement expérimental et les consommables, la dégradation de l'ARN est efficacement prévenue.
Étude de cas
Cyclisation et enrichissement in vitro de l'circRNA
Sur la base du système PIE, Yaohai Bio-Pharma a optimisé la séquence de l'circRNA, avec un taux de cyclisation de plus de 80 % par électrophorèse sur gel d'agarose (AGE). En utilisant la RNase R pour enrichir l'circRNA, les résultats d'électrophorèse E-gel montrent que le précurseur d'ARN linéaire est digéré, et après purification supplémentaire, la plupart des circRNA nickés peuvent être éliminés. La solution de purification a été développée en interne par Yaohai Bio-Pharma.
Circulation et enrichissement in vitro de l'circRNA
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