Le coiffage de l'extrémité 5' est une modification essentielle de l'ARNm. Les ARNm dotés de structures de capuchon, en particulier les structures Cap1, facilitent l'évasion des réponses immunitaires innées in vivo, ce qui entraîne une traduction efficace des protéines.
Le coiffage enzymatique (la méthode en deux étapes) est la méthode conventionnelle de coiffage de l'ARNm, similaire au processus de coiffage chez les organismes eucaryotes. Sous l'action d'une série d'enzymes, la 7-méthylguanine (m7G) est liée à l'extrémité 5' de l'ARNm par une liaison triphosphate 5'-5' et subit une modification par méthylation pour former la structure de coiffe Cap 1 (m7GpppN).
Schéma de formation de la structure naturelle de la calotte
Le déroulement de la réaction de bouchage enzymatique est le suivant :
L'ADN plasmidique linéarisé est utilisé comme modèle pour la transcription in vitro (IVT) en présence de polymérase T7, et l'ARNm avec une structure d'extrémité en 5' est formé après une purification en une étape à l'aide de l'enzyme de coiffage de la vaccine et de 2'-O. -méthyltransférase.
Détails des services
Service en option | Détails du service | Délai de livraison (jour) |
Coiffage enzymatique de l'ARNm | Réaction de coiffage enzymatique | 1 |
Optimisation de la réaction de plafonnement - en option | Conception et optimisation des composants de réaction | 3 ~ 7 |
Nos offres
- Conception et optimisation du composant de réaction de coiffage
Le composant de réaction de coiffage est optimisé et la production de transcrit d’ARNm est considérablement augmentée.
- Vérification de l'expression in vitro
L'ARNm coiffé est transfecté dans des cellules 293T et l'expression de la protéine cible peut être détectée.
- Contrôle strict de la RNase
Grâce à un contrôle rigoureux de l’environnement expérimental et des consommables RNaseson, la dégradation de l’ARNm est efficacement évitée.
Étude de cas
La plateforme d'ARNm de Yaohai Bio-Pharma a construit un processus de réaction de coiffage parfait.
Pour l'ARNm de l'eGFP, un pré-produit d'ARNm préparé par coiffage enzymatique, un signal de fluorescence de l'eGFP (fluorescence verte) à un niveau élevé peut être observé après transfection de cellules 293T pendant 24 heures, qui est détecté par Western Blot (WB), démontrant que le La protéine fluorescente verte améliorée par la protéine cible (eGFP) peut être exprimée efficacement in vitro.
Expression de l'ARNm eGFP coiffé enzymatique dans une cellule 293T
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