Par rapport au coiffage enzymatique en deux étapes, la méthode de coiffage co-transcriptionnel en une étape peut réduire considérablement le flux du processus. La méthode est axée sur les résultats et implique l’ajout d’analogues de cap à la réaction de transcription in vitro (IVT). Des analogues de capuchon peuvent être introduits au début de la transcription, et l'ARNm avec une structure de capuchon peut être obtenu une fois la transcription terminée. Les analogues actuels du capuchon de troisième génération peuvent éviter le plafonnement inverse et ajouter directement la structure Cap 1 au produit de transcription.
Pour des considérations sur l'immunogénicité et l'efficacité de la traduction de l'ARNm in vivo, le processus IVT adopte souvent certains types de NTP modifiés, et les nucléotides modifiés courants sont la pseudouridine (Ψ), la N1-méthyl-pseudouri-dine (N1Ψ) et la 5-méthylcytosine (5mC). .
Figure : Diagramme de la réaction de co-transcription et de coiffage de l'ARNm
Détails du service
Services | Détails du service | Délai de livraison (jour ouvrable) |
Coiffage co-transcriptionnel | Réponse transcriptionnelle in vitro (analogue Clean Cap) | 1-2 |
| Modifications nucléotidiques (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Suppression de la matrice d'ADN (DNase I) |
Optimisation des conditions IVT - en option | Conception et optimisation des composants de réaction | 3-7 |
Nos offres
- Stratégies diversifiées de modification des nucléotides
Plusieurs stratégies facultatives de modification des nucléotides peuvent améliorer l’expression des protéines.
- Système de réaction optimisé
Obtenez un taux de transcription élevé et une efficacité de coiffage élevée.
- Processus de bouchage stable
Atteindre un taux de plafonnement supérieur à 95 %.
- Contrôle strict de la RNase
Prévenez efficacement la dégradation de l’ARNm en contrôlant strictement la RNase dans l’environnement expérimental et les consommables.
Étude de cas
Yaohai Bio-Pharma a construit une plate-forme de processus de coiffage co-transcriptionnel mature, utilisant des analogues de capuchons propres pour ajouter directement la structure Cap1 tout en évitant le coiffage inversé. Après un prétraitement standardisé des échantillons et une détection par électrophorèse capillaire (CE), le taux de coiffage de l'ARNm de la protéine fluorescente verte améliorée (eGFP) peut atteindre plus de 95 %.
Efficacité de coiffage de l'ARNm eGFP supérieure à 95 %
L'ARNm de l'eGFP et l'ARNm de mCherry préparés par coiffage co-transcriptionnel sont transfectés respectivement dans des cellules 293T et un fort signal fluorescent est observé après 48 heures, suggérant que l'ARNm est efficacement exprimé dans les cellules 293T.
Expression de l'ARNm eGFP et de l'ARNm mCherry dans une cellule 293T
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