Par rapport au ciblage enzymatique en deux étapes, la méthode de ciblage co-transcriptionnel en une seule étape peut réduire significativement le processus. La méthode est orientée vers le résultat et implique l'ajout d'analogues de cap à la réaction de transcription in vitro (IVT). Les analogues de cap peuvent être introduits au début de la transcription, et un ARNm avec une structure de cap peut être obtenu à la fin de la transcription. Les analogues de cap de troisième génération actuels peuvent éviter le ciblage inverse et ajouter directement la structure Cap 1 au produit de transcription.
Pour tenir compte de l'immunogénicité de l'ARNm in vivo et de l'efficacité de traduction, le processus IVT utilise souvent certains types de NTP modifiés, et les nucléotides modifiés courants sont la pseudouridine (Ψ), la N1-méthyl-pseudouridine (N1Ψ) et la 5-méthylcytosine (5mC).
Figure : Schéma de la réaction de co-transcription et d'ajout du cap de l'ARNm
Détails du service
Service |
Détails du service |
Période de livraison (jour ouvrable) |
Ajout du cap par co-transcription |
Réponse de transcription in vitro (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Modifications des nucléotides (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Élimination du modèle d'ADN (DNase I) |
Optimisation des conditions d'IVT - optionnel |
Conception et optimisation des composants de la réaction |
3-7 |
Nos fonctionnalités
- Stratégies Diversifiées de Modification des Nucléotides
Plusieurs stratégies optionnelles de modification des nucléotides peuvent améliorer l'expression des protéines.
- Système de Réaction Optimisé
Atteindre un taux de transcription élevé et une efficacité de capping élevée.
- Processus de Capping Stable
Atteindre un taux de capping supérieur à 95 %.
- Contrôle strict de la RNase
Prévenir efficacement la dégradation de l'ARNm en contrôlant strictement la RNase dans l'environnement expérimental et les consommables.
Étude de cas
Yaohai Bio-Pharma a développé une plateforme mature de capping co-transcriptionnel, utilisant des analogues de cap propres pour ajouter directement la structure Cap1 tout en évitant le capping inverse. Après un traitement préalable normalisé des échantillons et une détection par électrophorèse capillaire (CE), le taux de capping de l'ARNm de la protéine fluorescente verte renforcée (eGFP) peut atteindre plus de 95 %.
efficacité de capping de l'ARNm eGFP supérieure à 95 %
Le ARN messager eGFP et le ARN messager mCherry préparés par co-transcription avec capping sont transfectés respectivement dans les cellules 293T, et un signal fluorescent intense est observé après 48h, suggérant que l'ARNm est exprimé de manière efficace dans les cellules 293T.
Expression de l'ARN messager eGFP et de l'ARN messager mCherry dans les cellules 293T
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