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Occupation du site de N-glycosylation

Occupation du site de N-glycosylation

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CDMO microbien

Occupation du site de N-glycosylation

L'occupation du site de N-glycosylation est une caractéristique physiologique des glycoprotéines et produit principalement du N-glycane. Le service d'analyse de l'occupation du site de N-glycosylation de Yaohai Bio-Pharma est réalisé par digestion, libération, enrichissement et analyse à l'aide de la chromatographie liquide-spectrométrie de masse à ionisation par électrospray-spectrométrie de masse (LC-ESI-MS/MS).

Nous avons été impliqués dans la caractérisation structurale des protéines de diverses grosses molécules, notamment les vaccins sous-unitaires recombinants, les nanobodies/VHH/anticorps à domaine unique (sdAbs), les fragments d'anticorps, les hormones/peptides, les cytokines, les facteurs de croissance (GF), les enzymes, les collagènes, etc.

Exigences réglementaires pour l'occupation des sites de N-glycosylation

Selon la directive ICH Q6B, « pour les glycoprotéines, la teneur en glucides (sucres neutres, sucres aminés et acides sialiques) est déterminée. De plus, la structure des chaînes glucidiques, le motif oligosaccharide (profil d’antenne) et le(s) site(s) de glycosylation de la chaîne polypeptidique sont analysés dans la meilleure mesure possible.

Méthode analytique
Analyse Méthodologie
Occupation du site de N-glycosylation LC-MS après digestion par déglycosylase et protéase
Procédures

1. Digestion des protéines pour générer de petits fragments peptidiques.

2. Libération de N-glycane à l'aide de l'endoglycosidase H ou de la PNGase F. L'endoglycosidase H coupe la liaison entre les deux résidus GlcNAc au cœur des glycanes liés à l'azote, tandis que la PNGase F est une glycoamidase qui rompt la liaison entre la GlcNAc et l'Asn, libérant ainsi l'ensemble. chaîne de sucre et conversion d'Asn en Asp avec une augmentation de masse de 1-Da.

3. Enrichissement en N-glycopeptide via HILIC (Chromatographie liquide à interaction hydrophile)

4. Analyse de l’occupation du site de glycosylation liée à N à l’aide de LC-ESI-MS/MS.

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