Les données de cartographie des peptides basées sur la chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS) fourniront une grande quantité d'informations sur la structure primaire et supérieure des protéines natives et recombinantes, y compris la couverture de la séquence d'acides aminés, les modifications post-traductionnelles (MPT, par exemple, glycosylation, oxydation, déamidation), les ponts disulfure, etc.
Yaohai Bio-Pharma propose des services d'analyse de cartographie des peptides pour votre protéine cible par LC-MS, afin d'accélérer vos recherches sur la structure des protéines.
Nous avons été impliqués dans la caractérisation structurale des protéines de diverses grandes molécules, y compris les vaccins à sous-unités recombinants, les nanocorps/VHHs/anticorps à domaine unique (sdAbs), les fragments d'anticorps, les hormones/peptides, les cytokines, les facteurs de croissance (FC), les enzymes, les collagènes, etc.
Exigences réglementaires pour la cartographie des peptides
La directive ICHQ6B recommande : « La fragmentation sélective du produit en peptides discrets est réalisée à l'aide d'enzymes ou de produits chimiques appropriés, et les fragments peptidiques résultants sont analysés par CPH ou toute autre méthode analytique appropriée. Les fragments peptidiques doivent être identifiés autant que possible en utilisant des techniques telles que l'analyse de la composition en acides aminés, le séquençage en terminaison N ou la spectrométrie de masse (SM). La cartographie peptidique de la substance active ou du produit médicamenteux (PM) à l'aide d'une méthode validée de manière appropriée est une méthode souvent utilisée pour confirmer la structure du produit souhaité lors de la mise sur le marché. »
Méthodes analytiques
| Analyse |
Méthodes |
| Cartographie des peptides |
Digestion par protéase et chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS) |
Procédure analytique
1. Réduction et alkylation
Le but est de réduire les ponts disulfure et de bloquer le thiol libre généré. La réduction des ponts disulfure aide à ouvrir la structure de la protéine, ce qui rend la digestion protéolytique plus efficace. Cette étape brisera également les ponts entre les chaînes dans le cas des protéines multicaténaires ayant des ponts disulfure reliant les chaînes (par exemple, les anticorps monoclonaux, mAbs).
2. Digestion de la Protéine à l'Aide d'Enzymes
Le but est de dégrader la protéine en peptides. Nous choisissons les enzymes en fonction de la séquence théorique de la protéine et des connaissances sur la digestion théorique de la protéine par les enzymes. En choisissant les enzymes de cette manière, cela devrait aboutir à la meilleure analyse de cartographie peptidique.
3. Analyse des Peptides Digestés Utilisation de la Chromatographie en Phase Inverse Haute Performance en Ligne avec Détection Ultraviolette (UV) et Spectrométrie de Masse par Ionisation par Pulvérisation Électrique (LC/ES-MS).
Séparation des peptides en fonction de leur polarité par LC (phase inverse-LC)
Lorsque le peptide s'échelonne depuis la colonne LC, le spectromètre de masse générera des informations de masse accompagnées d'informations sur les ions fragments, ce qui nous permet de déterminer les informations de séquence. Nous utilisons ces informations de séquence pour confirmer l'identité du peptide et fournir des informations primaires.
Nous pouvons également générer les informations de fragmentation des peptides lorsqu'ils entrent dans la source du spectromètre de masse depuis la colonne LC. En fonction des exigences de l'étude, il s'agit soit d'un LC-MS/MS sélectif, soit d'un non-sélectif, ce qui peut être considéré comme une forme de MS en tandem.
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