Les protéines recombinantes voient souvent l'oxydation des chaînes latérales d'acides aminés exposés, comme la tryptophane (Trp) et la méthionine (Met), modifiant les propriétés physicochimiques des protéines. Ces changements peuvent à leur tour contribuer à altérer les fonctions biologiques des protéines affectées, comme la perte de liaison, la réduction de l'activité enzymatique, ou une élimination inattendue rapide. Les protéines sont des cibles importantes pour les réactions oxydatives car elles réagissent rapidement avec les oxydants et sont abondantes dans les cellules, les tissus extracellulaires et les fluides corporels.
Par conséquent, surveiller l'oxydation des protéines est crucial pour le développement réussi de biopharmaceutiques.
Yaohai Bio-Pharma propose un service d'analyse de l'oxydation des acides aminés, qui vous permet de déterminer l'oxydation des acides aminés par Chromatographie en Phase Liquide-Couplée à la Spectrométrie de Masse (LC-MS).
Nous avons été impliqués dans la caractérisation structurale des protéines de diverses grandes molécules, y compris les vaccins à sous-unités recombinants, les nan anticorps/VHHs/anticorps à domaine unique (sdAbs), les fragments d'anticorps, les hormones/peptides, les cytokines, les facteurs de croissance (GF), les enzymes, les collagènes, etc.
Exigences réglementaires pour l'oxydation des acides aminés
Conformément aux lignes directrices ICH Q6B, les formes oxydées peuvent être détectées et caractérisées par des méthodes chromatographiques, électrophorétiques et/ou d'autres méthodes analytiques pertinentes (par exemple, la chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC), l'électrophorèse capillaire, la spectrométrie de masse, la dichroïsmétrie circulaire).
Méthodes analytiques
| Analyse |
Méthodes |
| Oxydation des Acides Aminés |
LC-MS, Chromatographie en Phase Liquide à Haute Performance en Phase Inverse (RP-HPLC) ou Chromatographie en Phase Liquide à Haute Performance par Interaction Hydrophobe (HIC-HPLC) et spectrométrie de masse |
Procédures analytiques
1. Préparation de l'échantillon
2. LC-MS
3. Analyse des données
Les résidus de tryptophane (Trp) sont particulièrement sensibles à l'oxydation en raison de la grande réactivité de l'indol aromatique avec les espèces réactives de l'oxygène. L'oxydation du Trp nécessite une certaine exposition des résidus de Trp qui sont normalement enfouis dans la structure tridimensionnelle de la protéine.
Cependant, lorsque les résidus de Trp sont oxydés, ils peuvent se transformer en une variété de produits ayant des propriétés très différentes de celles du Trp d'origine. Le chemin le plus courant pour l'oxydation du Trp inclut la formation de N-formylkinurénine (Différence de masse : +32).
Un autre acide aminé communément oxydé est la méthionine. L'atome de soufre dans le résidu de Met peut accepter soit un, soit deux atomes d'oxygène, conduisant à la formation de sulfoxyde (Différence de masse : +16) ou de sulfone (Différence de masse : +32), respectivement. Cette modification est relativement courante en raison de l'exposition typiquement élevée à la surface du Met.
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