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Enzymes pour la production d'ARNm

Enzymes pour la production d'ARNm

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Modalité

Enzymes pour la production d'ARN

Enzymes clés pour la production d’ARN longs

L’ARNm, en tant que type d’ARN à long codage, a fonctionné de manière sûre et efficace chez un plus large éventail de personnes pendant la COVID-19. D’autres ARN à codage long, comme l’ARN auto-amplificateur (saRNA) et l’ARNm circulaire (circRNA), ont également montré leur efficacité dans les études précliniques et cliniques.

La production à grande échelle d'ARN à codage long repose sur la transcription in vitro (IVT) par plusieurs réactions enzymatiques. Les étapes de la production d’ARN comprennent la préparation de la matrice d’ADN, la synthèse de l’ARN IVT, la circulation, l’élimination de l’ADN, la modification de l’ARN (coiffage et queue) et la purification de l’ARN.

Il existe plusieurs enzymes clés utilisées dans la production d'ARN à long codage (par exemple, ARNm, saRNA et circRNA), notamment les endonucléases de restriction, l'ARN polymérase T7 (T7 RNAP), l'inhibiteur de RNase, la pyrophosphatase inorganique, la DNase I, l'enzyme de coiffage de la vaccinia et la RNase R.

Processus

Enzyme

Fonction

Préparation du modèle d'ADN

Endonucléases de restriction

Linéarisation de l’ADN plasmidique (ADNp) pour éviter de générer une transcription plus longue.

Synthèse d'ARN IVT

ARN polymérase T7 (T7 RNAP)

Se lier au promoteur T7 et générer un transcrit d'ARN spécifique ; Jouez un rôle clé lors de la réaction IVT.

Inhibiteur de la RNase, recombinant

Inhibe l’activité de la RNase pendant la réaction IVT.

Pyrophosphatase, inorganique (iPPase)

Empêcher le pyrophosphate pendant la réaction IVT.

Suppression de l'ADN

DNase I

Retirez le modèle d'ADN.

Modification de l'ARN

Enzyme de coiffage de la vaccinale

Ajoutez des structures Cap1 aux extrémités 5' de l'ARNm IVT.

2'-O-méthyltransféras

enrichissement en circARN

RNase R

Digérer l’ARN linéaire et enrichir l’ARN circulaire.
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