Enzymes pour la production d'ARNm

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Enzymes pour la production d'ARN

Enzymes clés pour la production d'ARN long

l'ARNm, en tant que type d'ARN codant long, a fonctionné de manière sûre et efficace chez un plus large éventail de personnes pendant la pandémie de COVID-19. D'autres ARNs codants longs, comme l'ARN auto-amplifiant (saARN) et l'ARNm circulaire (circARN), ont également montré leur efficacité dans des études précliniques et cliniques.

La production à grande échelle d'ARN codant long repose sur la transcription in vitro (TIV) par plusieurs réactions enzymatiques. Les étapes de production d'ARN incluent la préparation du modèle d'ADN, la synthèse d'ARN par TIV, la circulation, le retrait de l'ADN, la modification de l'ARN (ciblage et ajout de queue), et la purification de l'ARN.

Il existe plusieurs enzymes clés utilisées dans la production d'ARN codant long (par exemple, ARNm, saARN et circARN), y compris les endonucléases de restriction, la polymérase d'ARN T7 (T7 RNAP), l'inhibiteur de RNase, la pyrophosphatase inorganique, la DNase I, l'enzyme de ciblage vaccinia et la RNase R.

Process	Enzyme	Fonction
Préparation du modèle d'ADN	Endonucléases de restriction	Linéarisation de l'ADN plasmidique (pDNA) pour éviter la génération de transcrits plus longs.
Synthèse d'ARN en IVT	Polymérase RNA T7 (T7 RNAP)	Se lier au promoteur T7 et générer un transcript ARN spécifique ; Jouer un rôle clé pendant la réaction IVT.
	Inhibiteur d'RNase, recombinant	Inhiber l'activité d'RNase pendant la réaction IVT.
	Pyrophosphatase, inorganique (iPPase)	Prévenir l'accumulation de pyrophosphate pendant la réaction IVT.
Élimination de l'ADN	DNase I	Retirez le modèle d'ADN.
Modification de l'ARN	Enzyme de capping Vaccinia	Ajoutez des structures Cap1 aux extrémités 5′ de l'ARNm en IVT.
Modification de l'ARN	2’-O-Méthyltransférase
enrichissement d'ARN circulaire	Rnase R	Digréder l'ARN linéaire et enrichir l'ARN circulaire.

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