Protéases de suppression d'étiquette
Pour améliorer la solubilité et simplifier le processus de purification des protéines recombinantes, les chercheurs ajoutent généralement des tags de fusion, parmi lesquels on trouve His-tag, la protéine liant au maltose (MBP) et la glutathion-S-transférase (GST), couramment utilisés.
Bien que le tag soit ajouté en tant que séquence supplémentaire de protéine, il doit être supprimé pour maintenir l'activité biologique dans l'industrie pharmaceutique. La suppression des tags de fusion nécessite l'utilisation de protéases spécifiques, telles que l'entérokinase (EK), la thrombine, la protéase du virus de flétrissement du tabac (TEVp), la protéase 3C du rhinovirus humain (HRV3C), la protéase SUMO, la protéase du virus à motifs vasculaires du tabac (TVMV) et la carboxypeptidase A/B (CPA/CPB).
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Type
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Enzyme
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Site de reconnaissance
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Protéases d'endotag
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Entérokinase (EK), entéropeptidase
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DDDDK↓
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Thrombine
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LVPR↓GS
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Protéase TEV
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ENLYFQ↓G
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Protéase HRV3C
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LEVLFQ↓GP
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Protéase SUMO
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Structure tertiaire SUMO
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Protéase TVMV
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ETVRFQG↓S
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Exoprotéases de suppression du tag
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Carboxypeptidase A (CPA)
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Acides aminés en C-terminale, sauf Pro, Lys et Arg
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Carboxypeptidase B (CPB)
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Lys et Arg en C-terminale
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Autres protéases
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Application
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Enzyme
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Fonction
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Autres protéases
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Protéase K
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Une sérine protéase qui digère les protéines en hydrolysant les liaisons peptidiques.
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IdeS, protéase IgG
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Enzymes dégradant l'IgG (Ides) qui coupent à un site spécifique de l'immunoglobuline G (IgG), générant des fragments Fab et Fc
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Protéase IgA1
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Une enzyme protéolytique qui coupe un site spécifique dans la séquence de la région charnière de l'immunoglobuline A1 humaine (IgA1).
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Nucléase
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Application
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Enzyme
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Fonction
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Nucléase
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Nucléase
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Coupe les acides nucléiques (ADN ou ARN) en hydrolysant les liaisons phosphodiestères.
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Enzyme de restriction
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Une endonucléase qui coupe l'ADN à ou près de sites spécifiques.
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Amidase
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Application
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Enzyme
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Fonction
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Amidase
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PNGase F
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Coupe entre le GlcNAc interne et les résidus d'asparagine des oligosaccharides à mannose élevée, hybrides et complexes.
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Yaohai Bio-Pharma propose une solution CDMO clé en main pour les réactifs enzymatiques.
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