In vitro-syntese af mRNA
De vigtigste komponenter i mRNA er 5’-cap, 5’-UTR, åben læse ramme (ORF), 5’-UTR og 5’ poly A hale, som er afgørende for at opretholde mRNA-funktionen. Forskere har brugt en række metoder til at identificere og optimere mRNA-sekvenser og strukturer.
Syntesen af mRNA udføres på baggrund af in vitro transskription (IVT) ved hjælp af lineære DNA-skabeloner, RNA-polymeraser (T3, T7 eller SP6), unmodificerede eller modificerede nukleotider, enzymersamt passende reaktanter.
5’ Cap-modifikation
Sekvenserne af moden mRNA fra eukaryocyt viser en 7-methylguanosin (m7G)-kappe på det 5' end, hvilket forbedrer mRNA-stabiliteten og translational effektivitet. Der findes to generelle metoder til at fange mRNA in vitro. Først kan mRNA kaptes sammen med in vitro-transkription ved at tilføje en kapanalog af m7GpppG-strukturen (f.eks. CleanCap) til IVT-systemet. Denne co-transcriptionale kapningsmetode giver en naturlig 5' kapselstruktur og øger kapningseffektiviteten til næsten 90-99%. For det andet kan mRNA-kartlægning også udføres ved at bruge kartlægningsenzymreaktioner efter in vitro-transkriptionsreaktionen.
PolyA-modifikation
Poly(A) hale forlænger også halveringsperioden for mRNA in vivo og forbedrer oversættelseseffektiviteten af mRNA. Længden på det amplificerede poly(A) hale bør være 100-300 nukleotider. Desuden øger modificeret adenosin stabilstanden for poly A-halen mod cellemæssig RNase-degradation. Poly A-hale kan indføres ved in vitro-transkription ved hjælp af en DNA-skabelon, der kodere poly A, hvilket resulterer i en bestemt længde af poly A-sekvens. Recombinant poly A polymerase kan også bruges ved enzymatisk polyadenylation efter transkription af mRNA.
Nukleotider Modification
Ændrede nukleosider kan inhibere genkendelsesreceptorer (PRR) for genkendelse og/eller aktivering og forbedre effektiviteten af mRNA-vacciner på to fuldstændig forskellige måder. Tilføjelsen af visse kemisk ændrede nukleosider, herunder pseudouridin (ψ), 1-methylpseudouridin (m1ψ), thiouridin (s4U) og 5-methylcytosin (m5C), kan forhindre aktiveringen af TLR7/8 og andre innate immunreceptorer, hvilket betydeligt reducerer den immungenende virkning af mRNA.
mRNA-leverance system
For at opretholde funktionen af mRNA skal det komme ind i værtscytaplasmats og udtrykke specifikke antigener. En af de største udfordringer ved mRNA-vacciner og -terapi er at levere mRNA til målceller med tilstrækkeligt høje oversættelsesniveauer, hvilket kræver yderst specifikke og effektive mRNA-leverance-systemer. Der er blevet udviklet og anvendt flere mRNA-leverancevektorer, herunder dendritiske celler (DC'er), protamin, kationiske polymerer og kationiske liposomer.
Komplekser af cationiske lipid med mRNA og andre præparater kan sammen danne 80-200 nm-størrelses nanopartikler, der kaldes lipid nanopartikler (LNPs). Som en af de mest avancerede mRNA-leverance-systemer omfatter LNP ioniserbare cationiske lipid, naturlige fosfolipid, cholesterol og polyetylen glykol (PEG). Flere RNA-vacciner og -terapiers (siRNA og mRNA) godkendt af U.S. Food and Drug Administration er baseret på LNP-leverance-systemer.
Yaohai Bio-Pharma Tilbyder En Total Løsning for RNA
|
Katalog RNA-produkter
- Katalog mRNA-produkter
- Katalog saRNA-produkter
- Katalog circRNA Produkter
|
Tilpasset RNA Syntese
- Tilpasset mRNA Syntese
- Tilpasning af saRNA Syntese
- Tilpasning af circRNA Syntese
|
mRNA CDMO-tjenester
- Procesudvikling
- GMP-produktion
- Aseptisk udfyldning og færdigbehandling
- Analyse og testing
|
Tilpassede Leverancer
|
Type
|
Leverancer
|
Specifikation
|
Ansøgninger
|
|
ikke-GMP
|
Råstof, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Præklinisk forskning såsom celletransfektion, Udvikling af analytiske metoder, Forstabilitetsstudier, Formulationsudvikling
|
|
Drug Product, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilitet
|
Råstof, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Forskningsbaseret nyt medicin (IND), Klinisk prøvegodkendelse (CTA), Forsyning til kliniske prøver, Biologisk licensansøgning (BLA), Kommerciel forsyning
|
|
Drug Product, LNP-mRNA
|
5000 flasker eller prefyldte sprøjtepenner/ karuseller
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
