Betydningen af downstream-procesudvikling (DSP).
Hele fermenteringsbouillonen indeholder målprotein eller plasmid, såvel som produkt- og procesrelaterede urenheder, f.eks. aggregater, mikrobielle cellesubstrater, værtscelleproteiner (HCP), værtscelle-DNA (HCD), endotoksin og antibiotika.
Derfor er det afgørende at designe en effektiv DSP, oprensningsproces, for at fjerne visse urenheder og producere højt oprenset lægemiddelstof af høj kvalitet. Derudover kan optimering af oprensningsprocessen hjælpe med at øge produktgenvinding, reducere omkostninger og forbedre processkalerbarhed og reproducerbarhed.
Nøgleord: procesudvikling, optimering og validering, oprensningsproces, kromatografi, eliminering af urenheder, HCP-fjernelse, HCD-eliminering, endotoksinfjernelse, proteindenaturering og genfoldning, VLP-samling, konjugation
Anvendelse: Biofarmaceutisk industri, human medicin, dyremedicin, vaccine, rekombinante store molekyler biologiske, rekombinante biologiske, biologisk reagens
DSP-løsninger fra Yaohai Bio-Pharma
Vi har stor erfaring med at isolere målproteiner eller plasmider fra komplekse matricer ved at udvikle og optimere nedstrøms oprensningsproces. Der er forskellige typer enhedsoperationer, der er egnede til oprensning af biologiske stoffer, herunder centrifugering, filtrering, homogenisering, alkalisk lysis, ultrafiltrering, udfældning, proteindenaturering og genfoldning, kromatografi osv.
Vores tilgængelige rensningsudviklingstjenester omfatter:
- Udvikling af hele oprensningsprocessen fra celle- eller supernatantopsamling til den endelige aktive ingrediens.
- Optimering af rensningsprocessen baseret på produkt- og procesrelaterede urenheder for at øge produktkvalitet og sikkerhed, fx HCP, HCD, endotoksin.
- Definition og optimering af nøgleparametre i en eller flere enhedsoperationer, herunder cellelyse, tangentiel flowfiltrering, harpiksscreening, kromatografi, proteindenaturering og genfoldning mv.
- Optimering af proces med hensyn til kvalitet, udbytte, genvinding, omkostninger og skalerbarhed.
- Validering af nedstrøms rensningsprocessen.
- Risikobaseret parameterområdevurdering og design af eksperimenter (DoE) i procesmodellering.
Service detaljer
Standardiserede protein- eller plasmidoprensningsplatforme er baseret på flere råoprensningstrin og mindre end 4 kromatografitrin, inklusive indfangning, mellemoprensning og polering.
| Service detaljer |
Enhedsdrift |
parametre |
| Rå rensning |
centrifugering |
Rotationshastighed, tid |
| Højtrykshomogenisering |
Samlet fast indhold, tryk, cyklusser |
| Kontinuerlig alkalisk lyse |
Forholdet mellem resuspenderede celler og lyseopløsning, lysetid |
| Tangentiel flowfiltrering |
Membranmateriale og porestørrelse, Feed Flow Rate Transmembrane Pressure (TMP), Filtratvolumen til membranarealforhold |
| udfældning |
Udfældningsmiddeltype og koncentration, tilsætningsstof, pH, temperatur, tid |
| Denaturering og genfoldning |
Inklusionskropsproteinopløselighed |
Denatureringsmiddelkoncentration (f.eks. urinstof, guanidin HCl, stærk ionisk detergent), detergenter (f.eks. natriumdodecylsulfat, SDS), reduktionsmidler (f.eks. Dithiothreitol, DTT), chelateringsmidler (ethylendiamintetraeddikesyre, EDTA), temperatur, tid |
| Protein genfoldning |
Genfoldningsmetoder (fortynding, dialyse eller SEC-genfoldning), proteinkoncentrationer, buffere, pH, temperatur, tid, oxidations- og reduktionsmidler (f.eks. glutathion, GSH/oxideret glutathion, GSSH, DTT/GSSH, cystein/cystin), tilsætningsstoffer til små molekyler (L-arginin, urinstof, guanidin/HCl og rengøringsmidler) |
| Opfangning, mellemrensning og polering |
AC (affinitetskromatografi) |
Flere typer kromatografiharpiks/søjle (f.eks. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), kolonnelængde og -diameter, buffersammensætning, injektionsvolumen, mobilfasesammensætning (adsorption og desorption), pH, flowhastighed, binding, Vaske- og elueringsbetingelser. |
| IEX (anion- eller kationbytterkromatografi) |
| HIC (hydrofobisk interaktionskromatografi) |
| Afsaltning og/eller størrelsesudelukkelseskromatografi (SEC) |
| RPC (Reversed Phase Chromatography) |
| MMC, blandet modus kromatografi |
Case study
Sag 1
Vi har fået til opgave at udvikle og optimere nedstrøms oprensningsprocessen for at øge proteinrenheden fra 85 % til 90 % og samtidig reducere kromatografitrin.
Yaohai leverede en robust og skalerbar oprensningsproces med 3 trins kromatografi for målproteinet, en bakteriel allergi. Og den endelige renhed nåede 95%.
Sag 2
Yaohai blev udpeget af vores klient til at optimere processen til fjernelse af endotoksin i den viruslignende partikel (VLP) vaccine.
Vores team udførte optimering af kromatografiparametre og forberedte et lægemiddelstof med en renhed på 98 % og endotoksinrest på 12.8 EU/mg.
Vores oplevelser
- Vi har været involveret i udvikling og fremstilling af forskellige store molekyler, herunder rekombinante underenhedsvacciner, VLP'er, hormoner (insulin, GLP-1, væksthormon), cytokiner (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), vækstfaktorer (EGF, FGF, NGF), nanobodies/enkeltdomæne-antistoffer (sdAbs), enzymer mv.
Udstyr
Vi bruger brancheførende AKTA Pure, AKTA Avant og Preparative HPLC-systemer til udførelse af forskellige kromatografimetoder, herunder affinitet, ionbytning, hydrofob interaktion, omvendt fase og størrelsesudelukkelseskromatografi.
DA
EN
AR
HR
CS
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
