Cellebaserede styrkeanalyser
Betydningen af mRNA-styrkeassay
Med den hurtige udvikling af mRNA-vacciner og terapeutika er der behov for et specifikt panel af analysemetoder for at teste styrken (definering af deres biologiske aktivitet), hvilket involverer mRNA's translationelle effektivitet. Disse metoder er typisk baseret på celletransfektion og funktionelle assays af målproteinet.
Yaohai Bio-Pharma tilbyder cellebaserede styrkeassays for mRNA-lægemiddelstoffer eller LNP-produkter, herunder celletransfektion (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 celler osv.) og ELISA eller Western Blotting (WB) assays.
Regulatoriske krav til potensanalyser
Ifølge WHO's lovgivningsmæssige overvejelser, "styrken af hvert parti af den endelige vaccine bør bestemmes ved hjælp af en passende kvantitativ og valideret funktionel metode(r). Potentielle in vitro-styrkeassays kan omfatte cellebaserede transfektionssystemer eller cellefri assays." Og USP anbefalede et "cellebaseret assay" for at teste styrken af mRNA, dvs. ekspression af målproteinet.
Analytisk metode
|
Analyse
|
Metoder
|
|
Styrkeanalyser
|
Cellebaseret transfektion og målprotein identificerer:
293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 celler osv.
|
Procedure
Trin 1. Cellebaseret transfektion med mRNA eller mRNA-LNP
Cellerne dyrkes og transficeres med mRNA eller mRNA-LNP. I detaljer transficeres mRNA efter at være blandet med et transfektionsreagens, mens mRNA-LNP transficeres direkte ind i cellerne. Efter 24-48 timer klares supernatanten indeholdende det udtrykte protein ved centrifugering.
Trin 2. Funktionelle analyser af målproteinet
Udfør ELISA- eller WB-assays for at vurdere den funktionelle binding af målproteinerne.
Case Study
Cellebaserede styrkeanalyser af mRNA-prøver
Yaohai-BioPharma har udviklet cellebaseret potensanalysemetode til mRNA, der involverer cellekultur, celletransfektion og proteinfunktionelle assays. Vi transficerede eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferase mRNA, spike protein mRNA ind i 293T celler og detekterede målprotein gennem fluorescens, luminescerende eller farvet signal, WB, ELISA.
Cellebaserede styrkeanalyser af mRNA-produkter af Yaohai Bio-Pharma
DA
EN
AR
HR
CS
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
