Brugerdefineret saRNA-syntese
Selvforstærkende mRNA (saRNA), også kendt som replikon-RNA, koder for in vitro transkription (IVT) mRNA-sekvenser og virale replikasegener afledt af alfavirus eller flavivira. Virale replikasegener tillader selvamplifikation af mRNA'et, hvilket resulterer i øget proteinekspression og en minimumskrævet dosis af RNA i sammenligning med ikke-amplifierende mRNA'er. Et andet aspekt er, at saRNA er et relativt stort molekyle (mere end 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma har etableret et sæt mRNA-synteseteknologier til at levere ikke-amplifierende mRNA og selvamplifierende mRNA (1000 nt~14000 nt), såsom sekvensdesign og optimering, IVT, oprensning, lyofilisering og lipid nanopartikel (LNP) indkapsling . Alle produkter udgives under strenge kvalitetskontrolstandarder.
Fig. 1 Strukturelle træk ved IVT-mRNA'er: Konventionelt, cirkulært og selvforstærkende mRNA.
Sekvenstræk ved selvforstærkende mRNA
Det selvforstærkende RNA omfatter fire ikke-strukturelle proteiner (benævnt nsP1, nsP2, nsP3 og nsP4), som er afledt af alfavirus, venezuelansk equine encephalitis-virus (VEEV). Blandt disse udviser nsP1 dobbelte enzymatiske aktiviteter, nemlig GTase og N7MTase, hvorimod nsP2 besidder RTPase-aktivitet, som er afgørende for afdækning af IVT-mRNA'et for at generere Cap 0-struktur. Derudover tjener nsP2 som en protease og helicase, hvilket letter den indviklede behandling af hele nsP-komplekset. Den præcise funktion af nsP3 forbliver uhåndgribelig, men det engagerer sig i interaktioner med forskellige værtscelleproteiner og bidrager derved til svækkelsen af det antivirale respons, der er monteret af værten.
En alfavirus subgenomisk promotor (SGP) region er placeret før genet af interesse (GOI). SGP-elementet letter initieringen af GOI-transkription ved at omgå læsningen af sekvensen, der koder for virale nsP-proteiner.
Fig. 2 Syntese og celleassays af eGFP saRNA fra Yaohai Bio-Pharma RNASci Platform.
Brugerdefinerede løsninger af saRNA
Synteseprotokollen for saRNA ligner mRNA: Brugerdefineret mRNA-syntese
- Sekvensdesign
- Plasmid skabelon forberedelse
- in vitro transkription (IVT)
- mRNA enzymatisk afdækning
- mRNA Co-transkriptionsafdækning
- mRNA oprensning
- mRNA-lyofilisering
- LNP indkapsling
- Analyse og test
DA
EN
AR
HR
CS
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
