I forhold til den to-trins enzymatiske capping kan den en-trins co-transkriptionelle capping-metode betydeligt reducere procesflowet. Metoden er resultatorienteret og involverer tilføjelse af cap-analoger til den in vitro transkription (IVT)-reaktion. Cap-analoger kan introduceres ved begyndelsen af transkriptionen, og mRNA med cap-struktur kan opnås ved afslutningen af transkriptionen. De nuværende tredjegenerations cap-analoger kan undgå omvendt capping og direkte tilføje Cap 1-struktur til transkriptionsproduktet.
Af hensyn til mRNA's immunogenitet in vivo og oversættelseseffektivitet anvender IVT-processen ofte visse typer af modificerede NTP'er, og de almindelige modificerede nukleotider er pseudouridin (Ψ), N1-methyl-pseudouridin (N1Ψ) og 5-methylcytosin (5mC).
Figur: Skitse af mRNA Co-transkription og Capping-Reaktion
Servicedetaljer
Service |
Servicedetaljer |
Leveringsperiode (arbejdsdag) |
Co-transkriptionel capping |
In vitro transskriptionsrespons (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Nukleotidmodifikationer (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Fjernelse af DNA-skabelon (DNase I) |
Optimering af IVT-betingelser - valgfrit |
Design og optimering af reaktionskomponenter |
3-7 |
Vores træk
- Diversificerede Nukleotidmodifikationsstrategier
Flere valgfrie nukleotidmodifikationsstrategier kan forbedre proteinekspressionen.
- Optimeret Reaktionssystem
Opnå et højt transkriptionsforhold og en høj capping-effektivitet.
Opnå en capping rate på mere end 95%.
Forhindre mRNA nedbrydning effektivt ved strikt kontrol af RNase i det eksperimentelle miljø og forbrugsmaterialer.
Case studie
Yaohai Bio-Pharma har oprettet et moden co-transcriptional capping procesplatform, hvor der bruges rene cap analoger til at tilføje Cap1-struktur direkte, samtidig med at man undgår omvendt capping. Efter standardiseret prøveforbehandling og kapillær-elektroforese (CE) detektering, kan capping raten for den forstærkede grøn fluorescerende protein (eGFP) mRNA nå mere end 95%.
capping effektivitet for eGFP mRNA på mere end 95%
Den co-transcriptionalt cappede eGFP mRNA og mCherry mRNA transfectes i 293T celler henholdsvis, og der observeres en stærk fluorescerende signal efter 48 timer, hvilket indikerer, at mRNA'et effektivt udtrykkes i 293T cellerne.
Udtryk for eGFP mRNA og mCherry mRNA i 293T celle
DA
EN
AR
HR
CS
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
