Cirkulær mRNA (circRNA) er blevet bredt anvendt i studiet af gener eller proteinfunktioner. Samtidig er det populært inden for udviklingen af præventive og terapeutiske biologiske midler, ligesom mRNA.
Yaohai Bio-Pharma har etableret en række circRNA-synsteknologier for at levere højkvalitets RNA, såsom sekvensdesign og optimering, in vitro-transkription (IVT), cirkularisering/cykling, renning og lipidnanopartikel (LNP)-indpakning. Alle produkter udløses under strenge kvalitetskontrolstandarder (QC).
I forhold til lineær mRNA er cirkulær RNA (circRNA) mere stabil i strukturen og er et af de største fokusområder i den nuværende forskning inden for nukleinsyres medicin. Den har en bred anvendelsesmulighed inden for forskellige områder, uanset om det er som kodende circRNA eller ikke-kodende circRNA, herunder præventive vacciner mod infektiøse sygdomme, terapeutiske kræftvacciner, terapeutiske kræftmedicin, proteinkvalifkationsterapi, regenerativ medicin, celle- og geneterapi (CGT), molekylær sponge rolle og RNA aptamer.
Proces | Valgfrit Tjenesteudbud | Servicedetaljer | Leveringsperiode (Dag) |
design og optimering af circRNA-sekvens | Design og optimering af kodende sekvenser | Codonoptimering af CDS | 1 |
Design og optimering af ikke-kodende sekvenser | Intron og Exon Sekvens, Homolog arm og Spacer Design og Optimering | 1-2 | |
Forberedelse af cirkulære plasmider | Genetisk syntese | GeneSyntese (Tredjepart) | 7-10 |
Plasmidforstærkning | Plasmidforstærkning | 2 | |
Plasmidudtrækning | |||
Forarbejdning af lineære plasmider | Plasmidlinearisering og -rensering | Plasmidlinearisering | 1 |
Lineariseret DNA-reneffektivering | |||
In Vitro Transkription og Cyclisation | In Vitro Transkription og Cyclisation | In Vitro Transkription og Cyclisationsreaktioner | 1-2 |
RNase R-digestion | |||
Optimering - valgfri | Reaktionssammensætning, Tidsoptimering | 2-5 | |
circRNA Renessering | Konventionel Renessemetode | Lithiumchlorid-præcipitation | 1 |
Rening med magnetiske partikler | 1 | ||
Højgradigt Rent circRNA Renning | Forberedende Højtryksvidendriftskromatografi (HPLC) | 1-2 | |
Bufferudskiftning | Ultrafiltrering | 1 | |
circRNA Lyophilisering | Prøvefyldning | Fyld | 2-3 |
Lyofilisering | Forfrynsning | ||
Primær tørning (sublimation) | |||
Sekundær tørning (desorption) | |||
circRNA-LNP Indpakning | LNP Indkapsling | Materiale- og væskeforebehandling | 2 |
Microfluidic enhedsblanding | |||
Bufferudskiftning | Tangentiel strømfiltration | 1 | |
Steril | Filtrering | ||
Kvalitetskontrol af plasmid-DNA | Koncentration/højdegrad | Ultraviolet (UV) Spektrofotometri | 1-2 |
Plasmidkonformation | Agarose gelelektrofores (AGE) | ||
Kapillær_elektrofores (CE) - Valgfri | |||
Plasmididentifikation | Restriktionsenzymeidentifikation/AGE | ||
Kvalitetskontrol af circRNA | Koncentration/højdegrad | Ultraviolet (UV) Spektrofotometri | - |
Renhed | Agarose Gelelektrofores (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - valgfri | 1 | ||
Kvalitetskontrol af circRNA-LNP | Indkapslings-effektivitet | RiboGreen-metode | 1 |
Partikelstørrelse | Dynamisk Lysstøbning (DLS) | 1 | |
Polydisperositetsindeks | Dynamisk Lysstøbning (DLS) | 1 | |
Zetapotential | Dynamisk Lysstøbning (DLS) | 1 | |
Cellebaseret effektivitetstest | Celletransfektion | Celleplacering, celletransfektion | 4 |
Opdagelse af målprotein | Fluorescensobservation, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Vi transfekterede forstærket grøn fluorescent protein circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA ind i 293T-celler og registrerede målprotein gennem fluorescens, lysende eller farve-signal, western blot (WB), enzym-kopplet immunosorbent test (ELISA).
Cellebaserede effektivitetstester af circRNA-prøver af Yaohai Bio-Pharma