N-glykosylieringspladsbesættelse er en fysiologisk egenskab af glykoproteiner og producerer hovedsagelig N-glykan. Yaohai Bio-Pharmas tjeneste til analyse af N-glykosylieringspladsbesættelse udføres ved fordøjning, frigivning, opkonsentring og analyse ved hjælp af Væskedetonering-Elektrospray-Ionisationsmasse-spektrometri-Masse-spektrometri (LC-ESI-MS/MS).
Vi har været inddraget i karakteriseringen af proteinstrukturen for forskellige store molekyler, herunder Rekombinante Subenhedsvaciner, Nanokroppe/VHH'er/Enkelt-domæne-antistoffer (sdAbs), Antibiotikfragmenter, Hormoner/Peptider, Cytokiner, Vækstfaktorer (GF), Enzymer, Kollagener osv.
Reguleringskrav for N-glykosylieringspladsbesættelse
Ifølge ICH Q6B-vejledning, "for glykoproteiner bestemmes karbohydratholdet (neutrale sukker, aminosukker og sialinsyror). Desuden analyseres strukturen af karbohydratkæderne, oligosukker-mønsteret (antenneprofilen) og glykosylationsstedet(e) på polypeptidkæden i den største udstrækning muligt."
Analytisk metode
| Analyse |
Metoder |
| N-glykosyleringsplads Besættelse |
LC-MS efter deglykosylase og protease fordøjelse |
Procedurer
1. Proteinfordøjelse af proteiner for at generere små peptidfragmenter.
2. Frigivelse af N-glykaner ved hjælp af endoglykosidase H eller PNGase F. Endoglykosidase H klipper båndet mellem de to GlcNAc-residuer i kernen af N-koblede glykaner, mens PNGase F er en glykoamidase, der klipper båndet mellem GlcNAc og Asn, hvilket frigiver hele sukkerkæden og konverterer Asn til Asp med en masseøgning på 1-Da.
3. Enrichment af N-glycopeptider via HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)
4. Analyse af N-koblet glykosylationsstedsoptagelse ved hjælp af LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
