Data fra peptidmapping baseret på væskediffusionskromatografi-masseanalyse (LC-MS) vil levere en stor mængde information om den primære og højere ordens struktur af nativ og rekombinant proteiner, herunder aminosyresekvensdækning, post-translationsle modifikationer (PTM'er, f.eks. glykosylation, oxidation, deamidation), disulfidbindinger osv.
Yaohai Bio-Pharma tilbyder analysestofor peptidmapping af dit målprotein ved LC-MS for at accelerere din forskning inden for proteinstruktur.
Vi har været inddraget i karakteriseringen af proteinstrukturen for forskellige store molekyler, herunder Rekombinante Subenhedsvaciner, Nanokroppe/VHH'er/Enkelt-domæne-antistoffer (sdAbs), Antibiotikfragmenter, Hormoner/Peptider, Cytokiner, Vækstfaktorer (GF), Enzymer, Kollagener osv.
Reguleringskrav for Peptidmapping
ICHQ6B vejledning anbefaler: "Valgfri fragmentation af produkterne i diskrete peptider udføres ved hjælp af egne enzym eller kemikalier, og de resulterende peptidfragmenter analyseres ved HPLC eller andre passende analytiske procedurer. Peptidfragmenter skal identificeres så godt som muligt ved brug af teknikker såsom aminosyre-sammensætningsanalyse, N-terminal sekvensering eller massespektrometri (MS). Peptidkartografi af det aktive stof eller lægemiddelprodukt (DP) ved hjælp af en tilstrækkelig valideret metode er en metode, der ofte bruges til at bekræfte den ønskede produktstruktur for batchfrigivelse."
Analytiske metoder
| Analyse |
Metoder |
| Peptidkartografi |
Proteasefordeling og Væskedynamisk Kromatografi-Massespektrometri (LC-MS) |
Analytisk Procedure
1. Reduktion og Alkylering
Formålet er at reducere disulfidbroer og blokere det genererede frie thiol. Reduktion af disulfidbroer hjælper med at åbne proteinstrukturen, hvilket gør proteolytisk spaltning mere effektiv. Denne trin vil også bryde broerne mellem kæderne i tilfældet med flere-kæde-proteiner, der har disulfidbroer, der linker kæderne (f.eks. monoklonale antistoffer, mAbs).
2. Spaltning af proteinet ved brug af enzym
Formålet er at nedbryde proteinet til peptider. Vi vælger enzym baseret på det teoretiske sekvens af proteinet og viden om den teoretiske spaltning af proteinet af enzym. Ved at vælge enzym på denne måde skal der opnås den bedste peptidkartoteksanalyse.
3. Analyse af de spredte peptider Ved hjælp af Online Reverse Phase-Høj Ydelse Væskeskromatografi med Ultraviolet (UV) og Elektrospray-Massespektrometri Detektion (LC/ES-MS).
Peptidskilning baseret på polaritet ved hjælp af LC (reverse phase-LC)
Når peptidet eluerer fra LC-kolonnen, vil massespektrometeret generere masseinformation sammen med fragmentionsinformation, hvilket gør det muligt for os at bestemme sekvensinformationen. Vi bruger sekvensinformationen til at bekræfte peptidets identitet og levere primær information.
Vi kan også generere fragmentationsinformationen fra peptiderne, når de går ind i massespektrometerkilden fra LC-kolonnen. Afhængigt af studiets krav er dette enten selektiv LC-MS/MS eller ikke-selektiv, hvilket kan betragtes som en form for tandem MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
