Deamidering af glutamin- og asparaginsidekæder er en almindelig modifikation med hensyn til indvirkning på proteinbiofarmaceutiske egenskaber. Deamidering kan forekomme i glutaminrester, men normalt med en meget lavere hastighed. Deamideringshastighederne er påvirket af temperatur, pH, lokal proteinstruktur og flankerende aminoacylrester.
Yaohai BioPharma tilbyder testservice for aminosyredeamidering, som giver dig mulighed for at detektere aminosyredeamidering ved væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS).
Vi har været involveret i proteinstrukturkarakterisering af forskellige store molekyler, herunder rekombinante underenhedsvacciner, nanostoffer/VHH'er/ enkeltdomæne antistoffer (sdAbs), antistoffragmenter, hormoner/peptider, cytokiner, vækstfaktorer (CF), enzymer, kollagener, etc.
Regulatoriske krav til aminosyredeamidering
I henhold til ICH Q6B-retningslinjerne kan deamiderede former påvises og karakteriseres ved kromatografiske, elektroforetiske og/eller andre relevante analytiske metoder.
Analytiske metoder
| Analyse |
Metoder |
| Deamidering |
Væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) |
Procedurer
fx asparaginal deamidering
1. Enzymatisk fordøjelse
2. LC-MS under High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) tilstand
3. Dataanalyse
Asparagin-deamidering sker via et succinimid-mellemprodukt (Suc), som er modtageligt for racemisering og hydrolyse, hvilket giver fire Asp-isomerer, herunder L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp og D-IsoAsp.
I teorien kunne Gln-deamidering generere fire tilsvarende Glu-isomerer gennem en proces svarende til Asn-deamidering.
Den højopløselige massespektrometri identificerer let 1-Da masseforskellen mellem Asn/Gln-holdige peptider og deres tilsvarende deamiderede modstykker Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
