N-glycans profilering er afgørende for produktionen af biofarmaceutiske produkter. Yaohai Bio-Pharma leverer N-glycan profileringsservice ved hjælp af væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) af frigivne og mærkede glykaner. De generelle trin til fremstilling af N-glycanprøver omfatter fordøjelse af glycoproteinet (GP), de-glycosylering, oprensning, mærkning/derivatisering og fastfaseekstraktion (SPE).
Vi har været involveret i proteinstrukturkarakterisering af forskellige store molekyler, herunder rekombinante underenhedsvacciner, nanostoffer/VHH'er/ enkeltdomæne antistoffer (sdAbs), antistoffragmenter, hormoner/peptider, cytokiner, vækstfaktorer (GF), enzymer, kollagener, etc.
Lovmæssige krav til N-Glycan profilering
Ifølge ICH Q6B guideline, "for glycoproteiner bestemmes kulhydratindholdet (neutrale sukkerarter, aminosukkere og sialinsyrer). Derudover analyseres strukturen af kulhydratkæderne, oligosaccharidmønsteret (antennær profil) og polypeptidkædens glycosyleringssted(er) i det omfang det er muligt.
Analytisk metode
| Analyse |
Metoder |
| N-glycan profilering |
Væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) analyse af frigivne og mærkede glykaner |
Procedurer
1. Enzymatisk glycanfrigivelse med Peptid N-Glycosidase F (PNGase F)
2. Derivatisering af frigivne glycaner med 2-aminobenzamid (2-AB)
3. Oprensning af de høstede N-glycaner på en TSK Amide - 80 kolonne, hvis der er store mængder rengøringsmidler, ikke-flygtige salte eller materialer med frie aminogrupper til stede
4. Mærkning med fluorescerende 2-aminobenzamid (2-AB)
5. LC-MS analyse af mærkede N-glycaner
6. Dataanalyse
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
INGEN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
