آنزیم های کلیدی برای تولید طولانی RNA
mRNA، به عنوان یک نوع RNA رمزگذاری طولانی، در طول COVID-19 در طیف وسیع تری از افراد به طور ایمن و کارآمد عمل کرد. سایر RNA های با کدگذاری طولانی، مانند RNA خودتقویت شونده (saRNA) و mRNA حلقوی (circRNA) نیز در مطالعات پیش بالینی و بالینی کارایی را نشان دادند.
تولید در مقیاس بزرگ RNA طولانی مدت به رونویسی in vitro (IVT) توسط چندین واکنش آنزیمی متکی است. مراحل تولید RNA شامل آماده سازی DNA الگو، سنتز IVT RNA، گردش خون، حذف DNA، اصلاح RNA (درپوش و باطله) و خالص سازی RNA است.
چندین آنزیم کلیدی در تولید RNA رمزگذاری طولانی (مانند mRNA، saRNA و circRNA) استفاده میشود، از جمله اندونوکلئازهای محدودکننده، T7 RNA پلیمراز (T7 RNAP)، مهارکننده RNase، پیروفسفاتاز معدنی، DNase I، آنزیم پوشاننده واکسن و RNase R.
روند
|
آنزیم
|
عملکرد
|
آماده سازی DNA الگو
|
اندونوکلئازهای محدود کننده
|
خطی کردن DNA پلاسمید (pDNA) برای جلوگیری از تولید رونوشت طولانی تر.
|
سنتز RNA IVT
|
RNA پلیمراز T7 (T7 RNAP)
|
به پروموتر T7 متصل شود و رونوشت RNA خاص تولید کند. در طول واکنش IVT نقش کلیدی بازی کنید.
|
بازدارنده RNase، نوترکیب
|
فعالیت RNase را در طی واکنش IVT مهار کنید.
|
پیروفسفاتاز، غیر آلی (iPPase)
|
جلوگیری از پیروفسفات در طی واکنش IVT.
|
حذف DNA
|
DNase I
|
الگوی DNA را بردارید.
|
اصلاح RNA
|
آنزیم پوشاننده واکسینیا
|
ساختارهای Cap1 را به انتهای 5' mRNA IVT اضافه کنید.
|
2'-O-Methyltransferas
|
غنی سازی circRNA
|
RNase R
|
RNA خطی را هضم کنید و RNA دایره ای را غنی کنید.
|
Yaohai Bio-Pharma راه حل CDMO یک مرحله ای را برای آنزیم ها ارائه می دهد