اهمیت توسعه فرآیند پایین دستی (DSP).
کل آبگوشت تخمیر حاوی پروتئین یا پلاسمید هدف و همچنین ناخالصی های مربوط به محصول و فرآیند است، به عنوان مثال، دانه ها، بسترهای سلول میکروبی، پروتئین های سلول میزبان (HCP)، DNA سلول میزبان (HCD)، اندوتوکسین و آنتی بیوتیک ها.
بنابراین، طراحی یک DSP کارآمد، فرآیند خالص سازی، برای حذف برخی ناخالصی ها و تولید ماده دارویی بسیار خالص و با کیفیت بسیار مهم است. علاوه بر این، بهینه سازی فرآیند تصفیه می تواند به افزایش بازیابی محصول، کاهش هزینه ها و بهبود مقیاس پذیری و تکرارپذیری فرآیند کمک کند.
کلمات کلیدی: توسعه فرآیند، بهینه سازی و اعتبار سنجی، فرآیند خالص سازی، کروماتوگرافی، حذف ناخالصی ها، حذف HCP، حذف HCD، حذف اندوتوکسین، دناتوره سازی و تاکردن مجدد پروتئین، مونتاژ VLP، کونژوگه
کاربرد: صنعت بیوداروسازی، پزشکی انسانی، پزشکی حیوانی، واکسن، بیولوژیک مولکول بزرگ نوترکیب، بیولوژیک نوترکیب، معرف بیولوژیکی
راه حل های DSP Yaohai Bio-Pharma
ما تجربه گسترده ای در جداسازی پروتئین ها یا پلاسمیدهای هدف از ماتریس های پیچیده با توسعه و بهینه سازی فرآیند تصفیه پایین دست داریم. انواع مختلفی از عملیات واحد مناسب برای خالص سازی بیولوژیک ها وجود دارد، از جمله سانتریفیوژ، فیلتراسیون، همگن سازی، لیز قلیایی، اولترافیلتراسیون، رسوب، دناتوره کردن پروتئین و تاکردن مجدد، کروماتوگرافی و غیره.
خدمات توسعه تصفیه موجود ما عبارتند از:
- توسعه کل فرآیند تصفیه از جمع آوری سلول یا مایع رویی تا ماده فعال نهایی.
- بهینه سازی فرآیند تصفیه بر اساس ناخالصی های مربوط به محصول و فرآیند برای افزایش کیفیت و ایمنی محصول، به عنوان مثال، HCP، HCD، اندوتوکسین.
- تعریف و بهینه سازی پارامترهای کلیدی در یک یا چند عملیات واحد، از جمله لیز سلولی، فیلتراسیون جریان مماسی، غربالگری رزین، کروماتوگرافی، دناتوره کردن پروتئین و تاکردن مجدد و غیره.
- بهینه سازی فرآیند از نظر کیفیت، بازده، بازیابی، هزینه و مقیاس پذیری.
- اعتبار سنجی فرآیند تصفیه پایین دست.
- ارزیابی محدوده پارامتر مبتنی بر ریسک و طراحی آزمایش‌ها (DoE) در مدل‌سازی فرآیند.
جزئیات خدمات
پلتفرم‌های استاندارد تصفیه پروتئین یا پلاسمید بر اساس چندین مرحله خالص‌سازی خام و کمتر از 4 مرحله کروماتوگرافی، از جمله جذب، خالص‌سازی میانی و پرداخت هستند.
| جزئیات خدمات |
عملیات واحد |
پارامترهای |
| خالص سازی خام |
سانتریفیوژ |
سرعت چرخش، زمان |
| هموژنیزاسیون فشار بالا |
کل محتوای جامد، فشار، سیکل ها |
| لیز قلیایی پیوسته |
نسبت سلولهای معلق مجدد به محلول لیز، زمان لیز |
| فیلتراسیون جریان مماسی |
متریال غشاء و اندازه منافذ، فشار غشایی نرخ جریان خوراک (TMP)، نسبت حجم فیلتر به سطح غشاء |
| ته نشینی |
نوع رسوب دهنده و غلظت، افزودنی، pH، دما، زمان |
| دناتوره سازی و تا زدن مجدد |
انحلال پروتئین بدن |
غلظت دناتورانت (به عنوان مثال، اوره، گوانیدین HCl، شوینده قوی یونی)، مواد شوینده (مانند سدیم دودسیل سولفات، SDS)، عوامل کاهنده (مانند دیتیوتریتول، DTT)، عوامل کیلات (اتیلن دی آمین تتراستیک اسید، EDTA)، دما، |
| تاخوردگی مجدد پروتئین |
روش‌های تا کردن مجدد (رقت‌سازی، دیالیز یا تا کردن مجدد SEC)، غلظت پروتئین، بافرها، pH، دما، زمان، عوامل اکسید کننده و کاهنده (مانند گلوتاتیون، GSH/گلوتاتیون اکسید شده، GSSH، DTT/GSSH، سیستئین/سیستین)، Small. (ال-آرژنین، اوره، گوانیدین/HCl و مواد شوینده) |
| گرفتن، تصفیه متوسط، و پرداخت |
AC (کروماتوگرافی میل ترکیبی) |
چندین نوع رزین/ستون کروماتوگرافی (به عنوان مثال، AC، IEX، HIC، SEC، RPC، MMC)، طول و قطر ستون، ترکیب بافر، حجم تزریق، ترکیب فاز متحرک (جذب و دفع)، pH، سرعت جریان، اتصال، شرایط شستشو و شستشو |
| IEX (کروماتوگرافی تبادل آنیون یا کاتیون) |
| HIC (کروماتوگرافی برهمکنش هیدروفوبیک) |
| نمک زدایی و/یا کروماتوگرافی حذف اندازه (SEC) |
| RPC (کروماتوگرافی فاز معکوس) |
| MMC، کروماتوگرافی حالت مخلوط |
بررسی موردی
مورد 1
ما مأمور شده‌ایم فرآیند تصفیه پایین‌دستی را توسعه و بهینه‌سازی کنیم تا خلوص پروتئین را از 85٪ به 90٪ افزایش دهیم و در عین حال مراحل کروماتوگرافی را کاهش دهیم.
Yaohai یک فرآیند خالص سازی قوی و مقیاس پذیر را با 3 مرحله کروماتوگرافی برای پروتئین هدف، یک آلرژی باکتریایی، ارائه کرد. و خلوص نهایی به 95 درصد رسید.
مورد 2
Yaohai توسط مشتری ما برای بهینه سازی فرآیند حذف اندوتوکسین واکسن ذرات شبه ویروس (VLP) منصوب شد.
تیم ما بهینه سازی پارامترهای کروماتوگرافی را انجام داد و یک ماده دارویی با خلوص 98% و باقیمانده اندوتوکسین 12.8EU/mg تهیه کرد.
تجربیات ما
- ما در توسعه و ساخت مولکول های بزرگ مختلف، از جمله واکسن های زیر واحد نوترکیب، VLP ها، هورمون ها (انسولین، GLP-1، هورمون رشد)، سیتوکین ها (اینترلوکین-2/IL-2، IL-15، IL-21) مشارکت داشته ایم. فاکتورهای رشد (EGF، FGF، NGF)، نانوبادی ها/آنتی بادی های تک دامنه (sdAbs)، آنزیم ها و غیره.
تجهیزات
ما از سیستم‌های پیشرو در صنعت AKTA Pure، AKTA Avant و Preparative HPLC برای اجرای روش‌های کروماتوگرافی مختلف از جمله میل ترکیبی، تبادل یونی، برهمکنش آبگریز، فاز معکوس و کروماتوگرافی حذف اندازه استفاده می‌کنیم.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
نه
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
