نرخ اشغال سایت N-گلیکوزیلاسیون ویژگی فیزیولوژیک پروتئین‌های گلیکوزیله است و به طور اصلی N-گلیکان تولید می‌کند. خدمات تحلیل نرخ اشغال سایت N-گلیکوزیلاسیون شرکت یاوهای بیو-فارما از طریق هضم، آزادسازی، غنی‌سازی و تحلیل با استفاده از کروماتوگرافی مایع- jonization اسپری الکترود (LC-ESI-MS/MS) انجام می‌شود.
ما در توصیف ساختار پروتئین‌های مختلف مولکول‌های بزرگ، از جمله واکسن‌های زیرمجموعه‌ای بازتولیدی، نانوبدی‌ها/ VHHs/ آنتی‌بادی‌های تک‌دامنه‌ای (sdAbs)، قطعه‌های آنتی‌بادی، هورمون‌ها/پپتیدها، سیتوکاین‌ها، عوامل رشد (GF)، انزیم‌ها، کالاجن‌ها، و غیره، درگیر بوده‌ایم.
مقررات مربوط به نرخ اشغال سایت N-گلیکوزیلاسیون
بر اساس راهنمای ICH Q6B، «برای گلیکوپروتئین‌ها، محتوای کربوهیدرات (شکر‌های خنثی، شکر‌های آمینو و اسید سیالیک) تعیین می‌شود. علاوه بر این، ساختار زنجیره‌های کربوهیدرات، الگوی اولیگوشکریدی (پروفایل آنتنی) و محل‌های گلیکوزیلاسیون در زنجیر پلیپپتید تا حد ممکن تحلیل می‌شود.»
روش تحلیلی
| تحلیل |
روش‌ها |
| حالت فعال سایت N-گلیکوزیلاسیون |
LC-MS پس از هضم با دگلیکوزیداز و پروتئاز |
رویه‌ها
۱. هضم پروتئین برای تولید قطعات پپتید کوچک.
۲. آزادسازی N-گلیکان با استفاده از اندوگلیکوزیداز H یا PNGase F. اندوگلیکوزیداز H پیوند بین دو مولکول GlcNAc در هسته گلیکان‌های N-پیوندی را شکست می‌دهد، در حالی که PNGase F یک گلیکوآمیداز است که پیوند بین GlcNAc و Asn را قطع کرده و کل زنجیره شکر را آزاد می‌کند و Asn را به Asp تبدیل می‌کند که با افزایش جرم ۱-دا نشان داده می‌شود.
۳. غنی‌سازی N-گلیکوپپتید با استفاده از HILIC (کروماتوگرافی مایع تعامل هیدروفیلیک)
۴. تحلیل وضعیت اشغال گلیکاسیون N-پیوندی با LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
