داده‌های نقشه‌برداری پپتیدی مبتنی بر کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی (LC-MS) مقدار زیادی اطلاعات در مورد ساختار اولیه و درجه بالاتر پروتئین‌های بومی و نوترکیب، از جمله پوشش توالی اسید آمینه، تغییرات پس از ترجمه (PTMs، به عنوان مثال، گلیکوزیلاسیون) ارائه می‌کند. ، اکسیداسیون، دآمیداسیون)، پیوندهای دی سولفید و غیره.
Yaohai Bio-Pharma خدمات تجزیه و تحلیل نقشه پپتیدی را برای پروتئین هدف شما توسط LC-MS ارائه می دهد تا تحقیقات شما را در مورد ساختار پروتئین سرعت بخشد.
ما در ویژگی‌های ساختاری پروتئین مولکول‌های بزرگ مختلف، از جمله واکسن‌های زیر واحد نوترکیب، نانوبادی‌ها/VHHs/آنتی‌بادی‌های تک‌دامنه (sdAbs)، قطعات آنتی‌بادی، هورمون‌ها/پپتیدها، سیتوکین‌ها، فاکتورهای رشد (GF)، آنزیم‌ها، نقش داشته‌ایم. و غیره.
الزامات نظارتی برای نقشه برداری پپتید
دستورالعمل ICHQ6B توصیه می کند، «تجزیه انتخابی محصول به پپتیدهای مجزا با استفاده از آنزیم ها یا مواد شیمیایی مناسب انجام می شود و قطعات پپتید حاصل با HPLC یا سایر روش های تحلیلی مناسب آنالیز می شوند. قطعات پپتید باید تا آنجا که ممکن است با استفاده از تکنیک هایی مانند آنالیز ترکیب اسید آمینه، توالی یابی N ترمینال یا طیف سنجی جرمی (MS) شناسایی شوند. نقشه پپتیدی ماده فعال یا محصول دارویی (DP) با استفاده از یک روش معتبر معتبر، روشی است که اغلب برای تایید ساختار محصول مورد نظر برای انتشار دسته ای استفاده می شود.
روش های تحلیلی
| تحلیل و بررسی |
مواد و روش ها |
| نقشه برداری پپتید |
هضم پروتئاز و کروماتوگرافی مایع - طیف سنجی جرمی (LC-MS) |
روش تحلیلی
1. احیا و آلکیلاسیون
هدف کاهش پل های دی سولفید و مسدود کردن تیول آزاد تولید شده است. کاهش پل های دی سولفید به باز کردن ساختار پروتئین کمک می کند که هضم پروتئولیتیک را کارآمدتر می کند. این مرحله همچنین باعث شکستن پل‌های بین زنجیره‌ها در مورد پروتئین‌های چند زنجیره‌ای می‌شود که دارای پل‌های دی سولفیدی هستند که زنجیره‌ها را به هم متصل می‌کنند (مانند آنتی‌بادی‌های مونوکلونال، mAbs).
2. هضم پروتئین با استفاده از آنزیم ها
هدف تجزیه پروتئین به پپتیدها است. ما آنزیم ها را بر اساس توالی نظری پروتئین و دانش هضم نظری پروتئین توسط آنزیم ها انتخاب کردیم. انتخاب آنزیم ها به این روش، باید به بهترین تجزیه و تحلیل نقشه پپتیدی منجر شود.
3. تجزیه و تحلیل پپتیدهای هضم شده با استفاده از روش کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا در فاز معکوس با اشعه ماوراء بنفش (UV) و تشخیص طیف سنجی جرمی الکترواسپری (LC/ES-MS).
جداسازی پپتید بر اساس قطبیت با استفاده از LC (فاز معکوس-LC)
همانطور که پپتید از ستون LC شسته می شود، طیف سنج جرمی اطلاعات جرمی همراه با اطلاعات یون قطعه تولید می کند که به ما امکان می دهد اطلاعات توالی را تعیین کنیم. ما از اطلاعات توالی برای تایید هویت پپتید و ارائه اطلاعات اولیه استفاده می کنیم.
ما همچنین می توانیم اطلاعات تکه تکه شدن را از پپتیدها تولید کنیم که آنها از ستون LC وارد منبع طیف سنج جرمی می شوند. بسته به نیازهای مطالعه، این LC-MS/MS انتخابی یا غیرانتخابی است که می تواند به عنوان شکلی از MS پشت سر هم در نظر گرفته شود.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
نه
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
