داده‌های نگاشت پپتیدی مبتنی بر کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی (LC-MS) اطلاعات فراوانی درباره ساختار اولیه و بالاتر پروتئین‌های طبیعی و بازتولیدی ارائه خواهد داد، شامل پوشش توالی اسیدهای آمینه، تغییرات پس از ترجمه (PTMs، مثلاً گلیکوزاسیون، اکسیداسیون، دیامیداسیون)، پیوندهای دی‌سلفید، و غیره.
یائوهای بیو-فارما خدمات تحلیل نگاشت پپتیدی را برای پروتئین هدف شما با LC-MS ارائه می‌دهد تا تحقیقات شما درباره ساختار پروتئین را شتاب بخشد.
ما در توصیف ساختار پروتئین‌های مختلف مولکول‌های بزرگ، از جمله واکسن‌های زیرمجموعه‌ای بازتولیدی، نانوبدی‌ها/ VHHs/ آنتی‌بادی‌های تک‌دامنه‌ای (sdAbs)، قطعه‌های آنتی‌بادی، هورمون‌ها/پپتیدها، سیتوکاین‌ها، عوامل رشد (GF)، انزیم‌ها، کالاجن‌ها، و غیره، درگیر بوده‌ایم.
نیازهای تنظیمی برای نگاشت پپتیدی
راهنمای ICHQ6B توصیه می‌کند، «تجزیه انتخابی محصول به پپتیدهای گسسته با استفاده از انزیم‌ها یا مواد شیمیایی مناسب انجام می‌شود و پپتیدهای ناشی حاصل از این فرآیند با HPLC یا روشهای تحلیلی دیگر مناسب تحلیل می‌شوند. باید تا جای ممکن پپتیدهای تکه‌ای را با استفاده از تکنیک‌هایی مانند تحلیل ترکیب اسیدهای آمینه، سفارش‌دهی N-ترمینال یا طیف‌سنجی جرمی (MS) شناسایی کرد. نقشه‌برداری پپتیدی ماده فعال یا محصول دارویی (DP) با استفاده از روش اعتبارسنجی شده‌ای روشی متداول برای تأیید ساختار محصول موردنظر در زمان آزادسازی دسته است.»
روشهای آنالیز
| تحلیل |
روش‌ها |
| نقشه‌برداری پپتید |
هضم پروتئولیتیک و کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی (LC-MS) |
فرآیند تحلیلی
۱. کاهش و آلکیلاسیون
هدف کاهش پل‌های دیسولفید و بستن تیول آزاد حاصله است. کاهش پل‌های دیسولفید کمک می‌کند تا ساختار پروتئین باز شود که این موضوع هضم پروتئین توسط آنزیم‌ها را کارآمدتر می‌سازد. این مرحله همچنین پل‌های دیسولفید بین زنجیره‌ها در صورت وجود پروتئین‌های چندزنجیره‌ای که پل‌های دیسولفید بین زنجیره‌ها دارند (مانند آنتی‌بادی‌های تک‌سر) را شکست خواهد داد.
هضم پروتئین با استفاده از آنزیم‌ها
هدف شکستن پروتئین به پپتیدهاست. ما آنزیم‌ها را بر اساس دنباله نظری پروتئین و دانش هضم نظری پروتئین توسط آنزیم‌ها انتخاب می‌کنیم. انتخاب آنزیم‌ها به این صورت باید منجر به بهترین تحلیل نقشه پپتید شود.
تحلیل پپتیدهای هضم‌شده استفاده از کروماتوگرافی فاز معکوس- عملکرد بالا مایع (HPLC) به همراه آشکارسازی فراوانی الکترومغناطیسی (UV) و جرم‌سنجی اسپری الکتریکی (LC/ES-MS).
جداکردن پپتیدها بر اساس قطبیت با استفاده از LC (LC فاز معکوس)
هنگامی که پپتید از ستون LC خارج می‌شود، طیف‌سنج جرمی اطلاعات جرم را همراه با اطلاعات یون شکسته تولید می‌کند، که این ما را قادر می‌سازد تا اطلاعات دنباله را تعیین کنیم. ما از این اطلاعات دنباله برای تأیید هویت پپتید و ارائه اطلاعات اولیه استفاده می‌کنیم.
همچنین می‌توانیم اطلاعات شکسته را از پپتیدها زمانی که به منبع طیف‌سنج جرمی از ستون LC وارد می‌شوند تولید کنیم. بسته به نیازهای مطالعه، این یا LC-MS/MS انتخابی است یا غیرانتخابی که می‌تواند به عنوان یک نوع از MS سلسله مراتبی در نظر گرفته شود.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
