با توسعه سریع واکسنهای mRNA و روشهای درمانی، پانل خاصی از روشهای آنالیز برای آزمایش قدرت (تعریف فعالیت بیولوژیکی آنها)، که شامل کارایی ترجمه mRNA است، مورد نیاز است. این روشها معمولاً مبتنی بر انتقال سلولی و سنجش عملکردی پروتئین هدف هستند.
Yaohai Bio-Pharma سنجش قدرت مبتنی بر سلول را برای مواد دارویی mRNA یا محصولات LNP، از جمله ترانسفکشن سلولی (293T، HepG2، HeLa، سلولهای K562، U937، Raw264.7 و غیره) و سنجشهای ELISA یا Western Blotting (WB) ارائه میکند.
با توجه به ملاحظات نظارتی WHO، "قدرت هر مقدار واکسن نهایی باید با استفاده از روش(های) عملکردی کمی و معتبر تعیین شود. سنجشهای بالقوه قدرت آزمایشگاهی ممکن است شامل سیستمهای ترانسفکشن مبتنی بر سلول یا سنجشهای بدون سلول باشد. و USP یک "آزمایش مبتنی بر سلول" را برای آزمایش قدرت mRNA، یعنی بیان پروتئین هدف توصیه کرد.
تحلیل و بررسی |
مواد و روش ها |
سنجش قدرت |
ترانسفکشن مبتنی بر سلول و پروتئین هدف شناسایی می کنند: سلول های 293T، HepG2، HeLa، K562، U937، Raw264.7 و غیره. |
مرحله 1. انتقال مبتنی بر سلول با mRNA یا mRNA-LNP
سلول ها کشت داده شده و با mRNA یا mRNA-LNP ترانسفکت می شوند. در جزئیات، mRNA پس از مخلوط شدن با یک معرف ترانسفکشن ترانسفکت می شود، در حالی که mRNA-LNP مستقیماً به سلول ها انتقال می یابد. پس از 24-48 ساعت، مایع رویی حاوی پروتئین بیان شده را با سانتریفیوژ شفاف کنید.
مرحله 2. سنجش عملکردی پروتئین هدف
برای ارزیابی اتصال عملکردی پروتئین های هدف، سنجش های ELISA یا WB را انجام دهید.
سنجش قدرت مبتنی بر سلول نمونههای mRNA
Yaohai-BioPharma روش سنجش قدرت مبتنی بر سلول را برای mRNA توسعه داده است که شامل کشت سلولی، ترانسفکشن سلولی و سنجش عملکردی پروتئین است. ما mRNA ژن eGFP، mRNA ژن mCherry، mRNA لوسیفراز، mRNA پروتئین اسپایک را به سلولهای 293T ترانسفکت کردیم و پروتئین هدف را از طریق سیگنال فلورسانس، نورتابی یا رنگی، WB، ELISA شناسایی کردیم.
سنجش قدرت مبتنی بر سلول محصولات mRNA توسط Yaohai Bio-Pharma