با توجه به تولید انبوه mRNA، رونویسی in vitro (IVT) روش کارآمدتر و بالغ‌تری است. واکنش IVT از DNA پلاسمید خطی شده حاوی پروموتر T7 به عنوان الگو استفاده می کند و mRNA با تری فسفات های نوکلئوزید (NTPs) به عنوان سوبسترا در حضور RNA پلیمراز T7 سنتز می شود.
اصلاح نوکلئوتید یک پیشرفت در اکتشاف mRNA است، که در آن مولکول‌های mRNA اصلاح نشده توسط حسگرهای RNA داخل سلولی شناسایی می‌شوند تا ایمنی ذاتی را فعال کنند. برای ملاحظات mRNA in vivo ایمنی زایی و کارایی ترجمه، فرآیند IVT معمولاً از انواع خاصی از NTPهای اصلاح شده استفاده می کند و نوکلئوتیدهای اصلاح شده رایج عبارتند از pseudouridine (Ψ)، N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ) و 5-methylcytosine (5mC).
فرآیند رونویسی in vitro mRNA
نمودار واکنش رونویسی در شرایط آزمایشگاهی (IVT).
جزئیات خدمات
خدمات اختیاری |
جزئیات خدمات |
مدت تحویل (روز کاری) |
رونویسی آزمایشگاهی (IVT) |
IVT، رونویسی در شرایط آزمایشگاهی |
1 |
| تغییرات نوکلئوتیدی (Ψ/N1Ψ/5mC و غیره) |
| حذف الگوی DNA (DNase I) |
بهینه سازی شرایط IVT - اختیاری |
طراحی و بهینه سازی اجزای واکنش IVT |
2-5 |
ویژگی های ما
- استراتژی های متنوع اصلاح نوکلئوتید
بهبود پایداری mRNA و بیان پروتئین در داخل بدن.
- طراحی و بهینه سازی تست دقیق
آماده سازی قطعه mRNA تا 10 کیلوبایت را می توان به دست آورد.
با بهینه سازی شرایط واکنش IVT، سرعت رونویسی تا 1:200 می رسد.
کنترل دقیق RNase از طریق یک محیط آزمایشی و مواد مصرفی می تواند به طور موثر از تخریب mRNA جلوگیری کند.
مطالعه موردی
سیستم واکنش IVT فعلی تقریباً برای سیستم های مصنوعی با طول حدود 100 nt بهینه شده است، نه برای mRNA هایی با طول دلخواه. هر چه توالی mRNA طولانی تر باشد، رونویسی آن دشوارتر است و بیشتر مستعد تخریب است.
به منظور تهیه توالی‌های mRNA سفارشی با طول حدود 10 کیلوبایت، Yaohai Bio-Pharma نمونه‌های باکیفیت با نسبت رونویسی بالا 1:135 را با موفقیت آماده کرده و 135 میکروگرم از محصولات mRNA اولیه خالص‌شده را پس از 1 میکروگرم پلاسمید خطی به دست آورده است. در شرایط آزمایشگاهی از طریق طراحی آزمایشی دقیق، بهینه سازی مداوم شرایط واکنش و کنترل دقیق RNase رونویسی شد.
شناسایی mRNA (الکتروفورز ژل آگارز)
FA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
نه
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
AF
MS
BE
MK
UR
BN
