انزیم‌های کلیدی برای تولید RNA طولانی
mRNA به عنوان نوعی از RNA کدگذاری طولانی، به صورت ایمن و کارآمد در محدوده گسترده‌ای از مردم طی بحران کووید-19 عمل کرد. دیگر RNAهای کدگذاری طولانی، مانند RNA خودتکثیر (saRNA) و mRNA دایره‌ای (circRNA)، نیز در مطالعات پیش‌بالینی و بالینی کارآمدی نشان دادند.
تولید بزرگ مقیاس RNA کدگذاری طولانی به روش تراجمه سلولی (IVT) با چند واکنش انزیمی وابسته است. مراحل تولید RNA شامل آماده‌سازی DNA الگو، تولید RNA از IVT، دوران‌دهی، حذف DNA، تغییرپذیری RNA (قبوکوبی و دنباله‌زنی)، و پاک‌کردن RNA است.
چندین انزیم کلیدی در تولید RNA کدگذاری طولانی (مانند mRNA، saRNA و circRNA) استفاده می‌شود، شامل انزیم قطع انتهایی، پلیمراز RNA T7 (T7 RNAP)، مهارکننده RNase، پیروفسفاتاز بدون جهت، DNase I، انزیم قبواژه وکسینیا و RNase R است.
|
فرآیند
|
آنزیم
|
عملکرد
|
|
آماده‌سازی DNA الگو
|
آندونوکلئازهای محدودکننده
|
خطی کردن DNA پلاسمید (pDNA) جهت جلوگیری از تولید ژنوم نسخه طولانی‌تر.
|
|
합성 RNA IVT
|
پلیمراز RNA نوع T7 (T7 RNAP)
|
چسبیدن به پروموتر T7 و تولید رنین RNA خاص؛ نقش کلیدی در واکنش IVT ایفا می‌کند.
|
|
معلول RNase، بازسازی شده
|
فعالیت RNase را در طول واکنش IVT غیرفعال کنید.
|
|
پیروفسفاتاز، انگلیزی (iPPase)
|
جلوگیری از تولید پیروفسفات طی واکنش IVT.
|
|
حذف دی ان ای
|
DNase I
|
الگوی DNA را حذف کنید.
|
|
اصلاح RNA
|
آنزیم قاب‌گذار Vaccinia
|
ساختارهای Cap1 را به انتهای 5′ mRNA تولید شده توسط IVT اضافه کنید.
|
|
انزیم 2'-O-متیلترانسفراز
|
| غنی‌سازی circRNA |
Rnase R |
RNA خطی را شکسته و RNA دایره‌ای را غنی کنید. |
یاوهای بیو-فارما راه‌حل کلی CDMO برای آنزیم‌ها ارائه می‌دهد
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
