Ключові ферменти для виробництва довгих РНК
мРНК, як тип довгої кодуючої РНК, безпечно та ефективно функціонує у широкого кола людей під час COVID-19. Інші довгокодуючі РНК, такі як самоампліфікуюча РНК (saRNA) і кільцева мРНК (circRNA), також показали ефективність у доклінічних і клінічних дослідженнях.
Широкомасштабне виробництво довгокодованої РНК залежить від транскрипції in vitro (IVT) за допомогою кількох ферментативних реакцій. Етапи виробництва РНК включають підготовку матричної ДНК, синтез РНК IVT, циркуляцію, видалення ДНК, модифікацію РНК (кепінг і хвіст) і очищення РНК.
Існує кілька ключових ферментів, які використовуються для виробництва РНК з довгим кодуванням (наприклад, мРНК, saRNA і circRNA), включаючи ендонуклеази рестрикції, T7 РНК-полімеразу (T7 RNAP), інгібітор РНКази, неорганічну пірофосфатазу, ДНКазу I, кепуючий фермент осповакцини та РНКазу R.
|
Процес
|
Фермент
|
функція
|
|
Підготовка шаблонної ДНК
|
Ендонуклеази рестрикції
|
Лінеаризація плазмідної ДНК (пДНК), щоб уникнути створення довшого транскрипту.
|
|
Синтез РНК IVT
|
Т7 РНК-полімераза (T7 RNAP)
|
Зв’язуватися з промотором Т7 і генерувати специфічний транскрипт РНК; Відіграють ключову роль під час реакції IVT.
|
|
Інгібітор РНКази, рекомбінантний
|
Пригнічують активність РНКази під час реакції IVT.
|
|
Пірофосфатаза, неорганічна (iPPase)
|
Запобігайте пірофосфату під час реакції IVT.
|
|
Видалення ДНК
|
ДНКаза I
|
Видаліть шаблон ДНК.
|
|
Модифікація РНК
|
Фермент, що покриває осповакцину
|
Додайте структури Cap1 до 5'-кінців мРНК IVT.
|
|
2'-O-Метилтрансфери
|
| збагачення circRNA |
РНКаза Р |
Розщеплюють лінійну РНК і збагачують кільцеву РНК. |
Yaohai Bio-Pharma пропонує універсальне рішення CDMO для ферментів
UK
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
