Біологічні речовини є складними великими молекулами, особливо чутливими до навколишнього середовища: температури, окислення, світла, йонного вмісту та зрізання. Критично проводити дослідження стійкості речовини та лікарського продукту у намірених умовах зберігання, прискорених умовах та умовах принудженої деградації. Дані про стійкість зазвичай використовуються для підтримки строку придатності, терміну придатності та умов зберігання.
У співпраці з вказівками ICH Q5C, Yaohai Bio-Pharma надає послуги досліджень стійкості для білків, пептидів, плазмід і мРНК, включаючи довготривалі дослідження стійкості, прискорені дослідження стійкості та дослідження принудженої деградації. Також у нас є всі необхідні можливості для зберігання проб та аналізу Критичних Якісних Атрибутів (CQA) для збору даних про стійкість.
Регуляторні вимоги до досліджень стійкості
За гідлайном ICH Q5C, «Необхідно розробити відповідні дані про стійкість для біотехнологічного/біологічного продукту, оскільки багато зовнішніх умов можуть впливати на потужність, чистоту та якість продукту. Також сильна рекомендація проводити дослідження активної речовини та лікарського продукту під прискореними та стресовими умовами».
Дослідження стійкості у реальний час (довгострокові)
У дослідженнях стійкості у реальний час (довгострокових) активна речовина або лікарський продукт зберігається у запланованих умовах зберігання і перевіряється до моменту, поки біологічні характеристики не вийдуть за межі прийнятого діапазону. Як результат довгострокових досліджень стійкості, можна встановити термін придатності, дату закінчення терміну придатності, умови зберігання та інтервали вибору/перевірки.
Таблиця 1. Частота тестування у довгострокових дослідженнях стійкості біологічних препаратів перед затвердженням
| Срок зберігання |
Інтервали тестування |
Часові точки |
| 1 рік або менше |
Щомісячно протягом перших 3 місяців;
Кожні 3 місяці потім
|
На 0, 1, 2, 3, 6, 9 та 12 місяцях |
| Більше 1 року |
Кожні 3 місяці протягом першого року;
Кожні 6 місяців протягом другого року;
Щорічно після цього
|
На 0, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36 місяцях, а також щорічно після цього |
Прискорені дослідження стійкості
Рекомендована температура зберігання ін'єкційних біофармацевтичних засобів зазвичай знаходиться в діапазоні від 2 до 8℃. Прискорені дослідження стійкості проводяться за коротший час у прискорених умовах, таких як висока температура. Дані про стійкість вважаються допоміжною інформацією для стійкості продукту і широко використовуються при визначенні терміну придатності та дати закінчення дії, а також при розробці формул.
Таблиця 2. Приклади прискорених досліджень стійкості
| Дослідження стійкості |
Прискорені умови |
Точки вибірки |
| Прискорені дослідження стійкості |
підвищена температура
відносна вологість
|
На 0, 1, 2, 3, 6 місяців |
Дослідження принудного знищення
Метою досліджень принудного знищення є збір інформації про стійкість у стресових умовах, таких як високі температури, вологість, світло, окислення, замороження-розморожування або механічний стрес (трусення, розрив). Дослідження принудного знищення лікарської речовини або лікарського продукту у екстремальних умовах можуть допомогти виявити ключові фактори/параметри, що призводять до знищення біологоактивних речовин. Ці дані корисні для оцінки стійкості формуляції та процесу виробництва.
Таблиця 3. Приклади досліджень принудного знищення
| Напруга |
Стресові умови |
Тривалість часу |
| Температура |
Висока температура (наприклад, 25℃, 30℃, 37℃, 40℃) |
Днів-місяців |
| Вологість |
Відносна вологість (0~100%) |
Днів-місяців |
| Світло |
Мінімум 1,2 мільйона лк год і 200 Вт год/м2 |
Кілька днів |
| Заморожування-розтування |
заморожування–розтування (від -20℃, -80℃ до 15℃) |
1~5 циклів |
| Взморювання, перемішування |
50~500 об/хв |
Години-дні |
Методи аналітичних досліджень для підтримки вивчення стійкості
| Критичні якісні атрибути (CQAs) |
Аналітичні методи |
| Загальна вміст протеїну |
УФ, BCA, Bradford, Lowry |
| Видимі частинки |
Візуальна перевірка |
| Агрегація, фрагменти |
Динамічне розсіяння світла Хроматографія розподілу за розмірами (SEC) ХPLC/УPLC, Капілярна електрофорез CE (CGE, CZE, cIEF/іCIEF), Електрофорез у агарозному гелі без знищення дисульфідних зв'язків SDS-PAGE |
| Карта пептидів та секвенування |
LC-MS/MS |
| Дисульфідні зв'язки |
LC-MS/MS |
| Пост-трансляційні модифікації (оксидация, ізомеризація, деамідація, гликозилування) |
LC-MS/MS |
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
