Дезамідування бічних ланцюгів глутаміну та аспарагіну є загальною модифікацією з точки зору впливу на властивості білкових біофармпрепаратів. Дезамідування може відбуватися в залишках глутаміну, але зазвичай з набагато меншою швидкістю. На швидкість дезамідування впливають температура, рН, локальна структура білка та фланкуючі аміноацильні залишки.
Yaohai BioPharma пропонує послуги тестування дезамідування амінокислот, які дозволяють виявити дезамідування амінокислот за допомогою рідинної хроматографії-мас-спектрометрії (LC-MS).
Ми брали участь у структурній характеристиці білків різних великих молекул, включаючи рекомбінантні субодиничні вакцини, нанотіла/VHH/однодоменні антитіла (sdAbs), фрагменти антитіл, гормони/пептиди, цитокіни, фактори росту (CF), ферменти, колагени, тощо
Нормативні вимоги до дезамідування амінокислот
Згідно з рекомендаціями ICH Q6B, дезамідовані форми можуть бути виявлені та охарактеризовані хроматографічними, електрофоретичними та/або іншими відповідними аналітичними методами.
Аналітичні методи
| Аналіз |
Методи |
| Дезамідування |
Рідинна хроматографія-мас-спектрометрія (РХ-МС) |
Процедури
наприклад, дезамідування аспарагінової кислоти
1. Ферментативне травлення
2. РХ-МС в умовах високоефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ)
3. Аналіз даних
Дезамідування аспарагіну відбувається через сукцинімідний проміжний продукт (Suc), який чутливий до рацемізації та гідролізу, утворюючи чотири ізомери Asp, включаючи L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp і D-IsoAsp.
Теоретично дезамідування Gln може генерувати чотири відповідні ізомери Glu за допомогою процесу, подібного до дезамідування Asn.
Мас-спектрометрія з високою роздільною здатністю легко ідентифікує різницю в масі в 1 Да між Asn/Gln-вмісними пептидами та їхніми відповідними дезамідованими аналогами Asp/Glu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
