Деамідація бічних ланцюгів глутаміну і аспарагіну є поширеною модифікацією з точки зору впливу на властивості біофармацевтичних протеїнів. Деамідація може відбуватися в резидуах глутаміну, але зазвичай з набагато нижчим темпом. Швидкості деамідації впливають температура, pH, локальна структура протеїну та сусідні аміноацилові резидуи.
Yaohai BioPharma пропонує послугу тестування деамідації амінокислот, яка дозволяє виявити деамідацію амінокислот за допомогою Жиднопhaзової Хроматографії-Мас-Спектрометрії (LC-MS).
Ми брали участь у характеристиці структури протеїнів різних великих молекул, включаючи Рекомбінантні Підодинкові Вакцини, Нанотіла/ВНН/Однодоменні Антитіла (sdAbs), Фрагменти Антитіл, Гормони/Пептиди, Цитокіни, Фактори Росту (CF), Ензими, Колагени тощо.
Нормативні вимоги щодо деамідації амінокислот
За угодою ICH Q6B, деамідовані форми можуть бути виявлені та характеризовані за допомогою хроматографічних, електрофоретичних та/або інших релевантних аналітичних методів.
Аналітичні методи
| Аналіз |
Методи |
| Деамідація |
Жидкостна хроматографія-мас-спектрометрія (LC-MS) |
Процедур
наприклад, деамідація аспартової кислоти
1. Ензимна діgestія
2. LC-MS у випадку високопродуктивної жидкостної хроматографії (HPLC)
3. Аналіз даних
Деамідація аспарагінової кислоти відбувається через проміжний продукт — сукцінімід (Suc), який піддається рацемізації та гідролізу, що дає чотири ізомери аспартової кислоти, включаючи L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp та D-IsoAsp.
Теоретично, деамідація Глн може генерувати чотири відповідних ізомера Глу шляхом процесу, схожого на деамідацію Асн.
Мас-спектрометр з високою розділювальною здатністю легко виявляє різницю у масі 1 Дa між пептидами, що містять Аsn/Гln, та їх відповідними деамідованими аналогами Аsp/Гlu.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
