Профілювання N-гліканів є необхідним для виробництва біофармацевтичних продуктів. Yaohai Bio-Pharma надає послугу профілювання N-гліканів за допомогою Жиднопhaзової Хроматографії - Мас-Спектрометрії (LC-MS) випущених і маркованих гліканів. Загальні кроки підготовки вибірки N-гліканів включають розщеплення глікопротеїну (GP), деглікозування, очищення, маркування/дериватизацію та Солід-Фазовий Екстракційний (SPE) процес.
Ми брали участь у характеристиці структури протеїнів різних великочастинкових молекул, включаючи Рекомбінаційні Підодинкові Вакцини, Нанотіла/ВНН/Однодоменні Антитіла (sdAbs), Фрагменти Антитіл, Гормони/Пептиди, Цитокіни, Фактори Зростання (GF), Ензими, Колагени тощо.
Регуляторні вимоги до профілювання N-гліканів
За гідом ICH Q6B, «для гликопротеїнів визначається вміст углеводів (нейтральних цукрів, амінокислотних цукрів та сіалових кислот). Крім того, аналізується структура ланцюгів углеводів, олигосахаридний шаблон (профіль антен) та місце гликозилювання поліпептидного ланцюга настільки, наскільки це можливо».
Аналітичний метод
| Аналіз |
Методи |
| Профілювання N-гліканів |
Хроматографія рідинна-мас-спектрометрія (LC-MS) аналіз вільних та маркованих гликанів |
Процедур
1. Ензимне вивільнення гликанів за допомогою Пептيد N-Глікозидази F (PNGase F)
2. Дериватизація вивільних гликанів 2-амінобензамідом (2-AB)
3. Очищення збранних N-гликанів на колонці TSK Amide - 80, якщо присутні великі кількості дезіпторів, немовних солей або матеріалів з вільними аміногрупами
4. Маркування флуоресцентним 2-амінобензамідом (2-AB)
5. LC-MS аналіз маркованих N-гликанів
6. Аналіз даних
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
