mRNA широко використовується у дослідженні функцій генів або більшов. Також вона є загальною при розробці профілактичних та лікувальних біопродуктів. Як загальна стратегія синтезу молекул RNA, транскрипція in vitro (IVT) дозволяє нам ефективно отримувати настроювані транскрипти.
Yaohai Bio-Pharma створила набір технологій синтезу mRNA для забезпечення високоякісного RNA, таких як проектування та оптимізація послідовностей, IVT, очищення, ліофілізація та енкапсуляція у ліпідних наночастинках (LNP). Усі продукти випускаються за строгими стандартами контролю якості (QC).
З початком пандемії COVID-19 у 2020 році, технологія mRNA зробила величезний крок вперед, і її пов'язані дослідження та застосування отримали небувале розвиток, включаючи профілактичні вакцини проти інфекційних хвороб, лікувальні онкологічні вакцини та препарати, терапію tumor, замісну терапію білками, регенеративну медицину та клітинну та генетичну терапію (CGT).
вакцина mRNA | терапевтична mRNA |
|
Процес | Опціональні послуги | Деталі послуги | Термін доставки (робочий день) | Результат виконання |
проектування та оптимізація послідовності mRNA | Проектування та оптимізація кодуючих послідовностей | Проектування послідовності CDS та оптимізація кодонів | 1-3 | Файл послідовності |
Проектування та оптимізація некодуючих послідовностей | Проектування та оптимізація UTR, поліA послідовностей | |||
Підготовка плазмідної транскрипційної матриці | Підготовка рекомбінантних плазмідів | Синтез генів | 7-10 | |
Ампліфікація та екстракція плазмідів | 4 | |||
Лінеаризація та очищення плазмідів | ||||
транскрипція mRNA in vitro | Ко-транскрипційне закривання (однопроцесовий метод) | Транскрипція in vitro (IVT) / Аналог капі | 1-2 | Н/Д |
Модифікація нуклеотидів (модифікація UTP/CTP) | ||||
Видалення шаблону DNA (DNase I) | ||||
Ензимна капування (двокроковий процес) | IVT | 2-3 | ||
Модифікація нуклеотидів (модифікація UTP/CTP) | ||||
Видалення шаблону DNA (DNase I) | ||||
очищення mRNA (хлорид литію/магнітні частинки) | ||||
Ензимна капування | ||||
очищення mRNA | Традиційна схема очищення | Випадання хлоридом литію | 1 | лікарська речовина mRNA |
Очищення магнітними частинками | ||||
Схема очищення хроматографічним стовпчиком | Комбінація кількох методів хроматографії | 1-2 | ||
Обмін буфера | Ультрафільтрація | 1 | ||
ліофілізація mRNA | Ліофілізація | Передзаморожування | 2-3 | ліофілізований порошок mRNA |
Первинне сушіння (сублимація) | ||||
Другорядне сушіння (дезорбція) | ||||
енкапсуляція mRNA | Енкапсуляція у ЛНП | Енкапсуляція у ЛНП | 2-3 | препарат mRNA-LNP |
Концентрація та обмін буфера | ||||
аналіз якості mRNA | речовина лікарського засобу mRNA / ліофілізований порошок | Концентрація, чистота | 1 | Доповідь про випробування |
Цілісність, ефективність капування, розподіл хвоста polyA | 2-5 | |||
лікарський продукт mRNA-LNP | Ефективність енкапсуляції | 1 | ||
Розмір частинок та їх розподіл | ||||
Поверхневий заряд | ||||
перевірка вираженості mRNA | оцінка клітин 293T | Посадка клітин | 4 | |
Тимчасова трансфекція клітин | ||||
Спостереження флуоресцентного сигналу | 1-3 | |||
Вестерн-блот (WB) / Імунoenзимний аналіз (ELISA) |
5' Кап |
▪ Без капа ▪ Cap0, спільно капований ▪ Cap1, спільно капований ▪ Cap1, ензимне капування |
5’ UTR/3’ UTR |
▪ Природна послідовність UTR ▪ Мутантна/Інженерна послідовність UTR |
3' ПоліА хвіст |
▪ Хвіст 100A ~120A (рекомендований) ▪ Сегментований поліаденіловий хвіст ▪ Інші спеціальні хвости |
Модифіковані нуклеозиди |
▪ Немодифіковані бази ▪ Псевдouriдин (Ψ) ▪ N1-Метилпсевдouriidine (N1Ψ) ▪ 5-метилцитозин (m5C) ▪ 5-метилуридин (m5U) ▪ 5-метоксуридин (5moU) ▪ 2-тиоуридин (s2U) ▪ 2′-O-метил-У ▪ Інші модифікації |
Інтегрований сервісний потік
Надаємо серію послуг від дизайну послідовності на початку до підготовки mRNA, контролю якості та перевірки вираження на кінці.
Міжнародний передовий дизайн і оптимізація послідовностей
Професійне проектування та оптимізація послідовності mRNA сприяє ефективному вираженню mRNA.
Розмаїті модифікації нуклеотидів
Ефективно збільшують вираження mRNA та зменшують небажані імунні відгуки на mRNA.
Доросла платформа очищення
Застосовуючи комбінований метод, який включає традиційний та самостійно розроблений способи очищення, отримуються вибратки mRNA з високою чистотою.
Повна платформа КБ
Розширює можливості контролю якості для задовolenня вимог регулярних тестів, таких як концентрація, чистота A260/280 та цілісність, а також високих стандартів контролю якості, таких як ефективність капсулювання/розподіл polyA.
Швидка доставка
Замовлене mRNA може бути доставлено протягом 7 днів, окрім синтезу послідовностей за межами компанії.