мРНК широко використовується для вивчення функцій генів або білків. Між тим, це поширене явище при розробці профілактичних і терапевтичних біопрепаратів. Як поширена стратегія синтезу молекул РНК, транскрипція in vitro (IVT) дозволяє нам ефективно отримувати персоналізовані транскрипти.
Компанія Yaohai Bio-Pharma розробила набір технологій синтезу мРНК для забезпечення високоякісної РНК, таких як розробка та оптимізація послідовності, IVT, очищення, ліофілізація та інкапсуляція ліпідних наночастинок (LNP). Вся продукція випускається відповідно до суворих стандартів контролю якості (QC).
Зі спалахом пандемії COVID-19 у 2020 році технологія мРНК прогресувала семимильними кроками, а пов’язані з нею дослідження та застосування набули безпрецедентного розвитку, зокрема профілактичні вакцини для профілактики інфекційних захворювань, терапевтичні онкологічні вакцини та ліки, терапія пухлин, білок замісна терапія, регенеративна медицина та клітинна та генна терапія (CGT).
мРНК-вакцина | Терапія мРНК |
|
Процес | Додаткова послуга | Сервісні деталі | Термін доставки (робочий день) | Доставні |
Проектування та оптимізація послідовності мРНК | Проектування та оптимізація послідовностей кодування | Дизайн послідовності CDS та оптимізація кодонів | 1-3 | Файл послідовності |
Проектування та оптимізація некодуючих послідовностей | Проектування та оптимізація UTR, polyA послідовностей | |||
Приготування плазміди шаблону транскрипції | Приготування рекомбінантної плазміди | Синтез генів | 7-10 | |
Ампліфікація та екстракція плазмід | 4 | |||
Лінеаризація та очищення плазмід | ||||
Транскрипція мРНК in vitro | Котранскрипційне обмеження (одноетапний метод) | Транскрипція in vitro (IVT) / Cap аналог | 1-2 | N / A |
Модифікації нуклеотидів (модифікації UTP/CTP) | ||||
Видалення шаблону ДНК (DNase I) | ||||
Ферментативне обмеження (двоетапний процес) | IVT | 2-3 | ||
Модифікації нуклеотидів (модифікації UTP/CTP) | ||||
Видалення шаблону ДНК (DNase I) | ||||
Очищення мРНК (хлорид літію/магнітні кульки) | ||||
Ферментативне укупорювання | ||||
Очищення мРНК | Звичайна схема очищення | Осадження хлориду літію | 1 | мРНК лікарська речовина |
Очищення магнітними кульками | ||||
Схема очищення хроматографічної колонки | Комбінація кількох методів хроматографії | 1-2 | ||
Буферний обмін | Ультрафільтрація | 1 | ||
Ліофілізація мРНК | Ліофілізація | Попереднє заморожування | 2-3 | мРНК ліофілізований порошок |
Первинна сушка (сублімація) | ||||
Вторинна сушка (десорбція) | ||||
Інкапсуляція мРНК | Інкапсуляція LNP | Інкапсуляція LNP | 2-3 | продукт мРНК-LNPDrug |
Концентрація та буферний обмін | ||||
Аналіз якості мРНК | мРНК лікарська речовина/ ліофілізований порошок | Концентрація, чистота | 1 | Протокол випробування |
Цілісність, ефективність укупорки, розподіл хвоста polyA | 2-5 | |||
мРНК-LNP лікарський продукт | Ефективність інкапсуляції | 1 | ||
Розмір і розподіл частинок | ||||
Поверхневий заряд | ||||
Перевірка експресії мРНК | Оцінка клітин 293T | Осередкове покриття | 4 | |
Транзиторна трансфекція клітин | ||||
Спостереження сигналу флуоресценції | 1-3 | |||
Вестерн-блот (WB)/Імуноферментний аналіз (ELISA) |
5' Cap |
▪ Без кришки ▪ Cap0, co-capped ▪ Cap1, co-capped ▪ Cap1, ферментативне обмеження |
5' UTR/3' UTR |
▪ Природна послідовність UTR ▪ Послідовність мутантів/сконструйованих UTR |
3' PolyA хвіст |
▪ 100A ~120A хвіст (рекомендовано) ▪ Сегментований поліА хвіст ▪ Інші спеціальні хвости |
Модифіковані нуклеозиди |
▪ Немодифіковані основи ▪ Псевдоуридин (Ψ) ▪ N1-метилпсевдоуридин (N1Ψ) ▪ 5-метилцитозин (m5C) ▪ 5-метилуридин (m5U) ▪ 5-метоксиуридин (5moU) ▪ 2-тіоуридин (s2U) ▪ 2′-O-метил-U ▪ Інші модифікації |
Потік інтегрованих послуг
Надайте низку послуг від початкового проектування послідовності до підготовки внутрішньої мРНК, контролю якості та перевірки експресії.
Міжнародний передовий дизайн та оптимізація послідовності
Професійний дизайн і оптимізація послідовності мРНК сприяють ефективній експресії мРНК.
Різноманітні модифікації нуклеотидів
Ефективно підвищують експресію мРНК і зменшують несприятливі імунні реакції мРНК.
Зріла платформа очищення
Поєднуючи звичайний і власно розроблений метод очищення, зразки мРНК отримують з високою чистотою
Повна платформа QC
Розширте можливості контролю якості, щоб відповідати вимогам рутинних тестів, таких як концентрація, чистота A260/280 і цілісність, а також високим вимогам контролю якості, таким як ефективність укупорки/розподіл поліА.
Швидка доставка
Спеціалізована мРНК може бути доставлена всього за 7 днів, за винятком синтезу послідовності стороннім виконавцем.