Плацмідна DNA, як у vitro транскрипція (IVT) шаблон, є важливим сировинним матеріалом для виробництва mRNA. Висока видача, висока чистота та висока відновлюваність плацмідної DNA є головними метою під час розробки процесу плацмід.
Yaohai Bio-Pharma пропонує комплексне рішення для розробки плацмід, включаючи вищострічний (ферментація), нижчострічний (очищення) процеси розробки, характеристики процесу та його валідацію. Ми маємо широкий досвід покращення видачі плацмід та їх ізоляції з складних матриць за допомогою розробки та оптимізації процесів ферментації, очищення та вилучення забруднювачів.
Основний біопроцес для виробництва плацмід включає: Escherichia coli (E. coli) ферментацію, збір клітин та алкалінну лізис, прояснення, концентрацію, триетапний хроматографічний процес (захоплення, проміжне очищення та довідкове очищення), а також концентрацію.
Деталі послуги | Одиниці операцій | Параметри |
E. coli ферментація |
Фляшка для випарювання | Склад середовища, антибіотик, об'єм початкової культури, температура росту та ін. |
Ферментатор (7 L) |
Антибіотик, об'єм початкової культури, температура росту, pH, розчинений кисень (DO), режим подавання (наприклад, фід-батч), підкормна середовище, час ферментації та ін. |
|
Збор клітин | Мікрофіltraція | Стандарт E. coli процес збору |
Лізис клітин | Переподілення клітин, алкальний лізис, нейтралізація | Співвідношення алкалі, час лізису |
Очищення | Фільтрація | Попереднє фільтрування, 20 мкм і фільтр 5 мкм (віддано перевагу) |
Концентрація | Ультрафільтрація, тангенціальне потокове фільтрування | Розмір пор (або NMWC), Трансмембранный тиск (TMP), Флукс, співвідношення об'єму фільтрату до площі мембран |
Трьохетапна хроматографія | Хроматографія розподілу за розмірами (SEC) або гелеве фільтраційне хроматографування (GFC) | Довжина і діаметр колонки, склад буфера, об'єм введень, склад подвижньої фази (адсорбція і дезорбція), pH, швидкість потоку, умови еквалібрування, зв'язування, промивання та елювання. |
Хроматографія афінітету (AF) | ||
Хроматографія іонового обміну з аніонами (AEX) | ||
Концентрація | Ультрафільтрація, тангенціальне потокове фільтрування | Розмір пор (або NMWC), Трансмембранный тиск (TMP), Флукс, співвідношення об'єму фільтрату до площі мембран |
Більше розв'язків для процесу очищення біологічних препаратів |