Значення розвитку процесу нижньої течії (DSP).
Весь ферментаційний бульйон містить цільовий білок або плазміду, а також домішки, пов’язані з продуктом і процесом, наприклад, агрегати, субстрати мікробних клітин, білки клітини-господаря (HCP), ДНК клітини-господаря (HCD), ендотоксин і антибіотики.
Тому надзвичайно важливо розробити ефективний DSP, процес очищення, щоб видалити певні домішки та отримати високоочищену та високоякісну лікарську речовину. Крім того, оптимізація процесу очищення може допомогти збільшити вилучення продукту, зменшити витрати та покращити масштабованість процесу та його відтворюваність.
Ключові слова: розробка процесу, оптимізація та валідація, процес очищення, хроматографія, видалення домішок, видалення HCP, видалення HCD, видалення ендотоксину, денатурація та рефолдинг білка, збірка VLP, кон’югація
Застосування: біофармацевтична промисловість, медицина людини, медицина тварин, вакцина, рекомбінантні біопрепарати з великою молекулою, рекомбінантні біопрепарати, біологічний реагент
Рішення DSP компанії Yaohai Bio-Pharma
Ми маємо значний досвід виділення цільових білків або плазмід зі складних матриць шляхом розробки та оптимізації подальшого процесу очищення. Існують різні типи операцій, придатних для очищення біологічних препаратів, включаючи центрифугування, фільтрацію, гомогенізацію, лужний лізис, ультрафільтрацію, осадження, денатурацію та рефолдинг білка, хроматографію тощо.
Наші послуги з розробки системи очищення включають:
- Розробка всього процесу очищення від збору клітин або супернатанту до кінцевого активного інгредієнта.
- Оптимізація процесу очищення на основі продукту та домішок, пов’язаних з процесом, для підвищення якості та безпеки продукту, наприклад, HCP, HCD, ендотоксин.
- Визначення та оптимізація ключових параметрів в одній або кількох установках, включаючи лізис клітин, фільтрацію тангенціального потоку, скринінг смоли, хроматографію, денатурацію та рефолдинг білка тощо.
- Оптимізація процесу з точки зору якості, виходу, відновлення, вартості та масштабованості.
- Валідація процесу очищення на нижній частині потоку.
- Оцінка діапазону параметрів на основі ризику та планування експериментів (DoE) у моделюванні процесу.
Сервісні деталі
Стандартизовані платформи для очищення білка або плазміди базуються на кількох грубих етапах очищення та менш ніж 4 етапах хроматографії, включаючи захоплення, проміжне очищення та полірування.
| Сервісні деталі |
Операції підрозділу |
параметри |
| Сире очищення |
Центрифугування |
Швидкість обертання, час |
| Гомогенізація під високим тиском |
Загальний вміст твердих речовин, тиск, цикли |
| Безперервний лужний лізис |
Співвідношення ресуспендованих клітин до розчину для лізису, час лізису |
| Фільтрація тангенціального потоку |
Матеріал мембрани та розмір пор, швидкість потоку живлення, трансмембранний тиск (TMP), співвідношення об’єму фільтра та площі мембрани |
| Опади |
Тип і концентрація осаджувача, добавка, pH, температура, час |
| Денатурація та рефолдинг |
Солюбілізація білка тіла включення |
Концентрація денатуранта (наприклад, сечовина, гуанідин HCl, сильний іонний детергент), миючі засоби (наприклад, додецилсульфат натрію, SDS), відновники (наприклад, дитіотреїтол, DTT), хелатні агенти (етилендіамінтетраоцтова кислота, EDTA), температура, час |
| Рефолдинг білка |
Методи рефолдингу (розведення, діаліз або SEC рефолдинг), концентрації білка, буфери, рН, температура, час, окислювачі та відновники (наприклад, глутатіон, GSH/окислений глутатіон, GSSH, DTT/GSSH, цистеїн/цистин), маломолекулярні добавки (L-аргінін, сечовина, гуанідин/HCl та миючі засоби) |
| Захоплення, проміжне очищення та полірування |
AC (афінна хроматографія) |
Кілька типів хроматографічної смоли/колонки (наприклад, AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), довжина та діаметр колонки, склад буфера, об’єм ін’єкції, склад рухомої фази (адсорбція та десорбція), pH, швидкість потоку, зв’язування, Умови промивання та елюювання. |
| IEX (аніонна або катіонообмінна хроматографія) |
| HIC (хроматографія гідрофобної взаємодії) |
| Знесолення та/або ексклюзійна хроматографія (SEC) |
| RPC (обернено-фазова хроматографія) |
| MMC, змішана хроматографія |
Вивчення проблеми
Справа 1
Нам доручено розробити та оптимізувати процес очищення, щоб підвищити чистоту білка з 85% до 90% при скороченні етапів хроматографії.
Компанія Yaohai запропонувала надійний і масштабований процес очищення з 3 етапами хроматографії для цільового білка, бактеріальної алергії. І кінцева чистота досягла 95%.
Справа 2
Yaohai був призначений нашим клієнтом для оптимізації процесу видалення ендотоксинів у вакцині вірусоподібних частинок (VLP).
Наша команда провела оптимізацію параметрів хроматографії та підготувала лікарську субстанцію з чистотою 98% та залишком ендотоксину 12.8EU/мг.
Наш досвід
- Ми брали участь у розробці та виробництві різних великих молекул, включаючи рекомбінантні субодиничні вакцини, VLP, гормони (інсулін, GLP-1, гормон росту), цитокіни (інтерлейкін-2/IL-2, IL-15, IL-21). ), фактори росту (EGF, FGF, NGF), нанотіла/однодоменні антитіла (sdAbs), ферменти тощо.
Обладнання
Ми використовуємо провідні в галузі системи AKTA Pure, AKTA Avant і Preparative HPLC для виконання різних методів хроматографії, включаючи афінну, іонообмінну, гідрофобну взаємодію, обернену фазу та ексклюзійну хроматографію.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
