Визначення молекулярної маси методом РХ-МС
Інтактна молекулярна маса завжди вважалася важливою характеристикою біопрепаратів. Аналіз непошкодженої молекулярної маси використовується для демонстрації білкових/пептидних продуктів і перевірки біопрепаратів. Вимірювання молекулярної маси є вимогою нормативних вказівок.
Yaohai Bio-Pharma пропонує аналіз інтактної молекулярної маси в нативних, відновлених, N-деглікозильованих умовах. Ми використовуємо рідинну хроматографію-мас-спектрометрію (РХ-МС) для визначення молекулярної маси непошкодженої речовини.
Нормативні вимоги до молекулярної маси
У ICH Q6 рекомендовано, що «молекулярну масу (або розмір) визначають за допомогою ексклюзійної хроматографії, електрофорезу в SDS-поліакриламідному гелі (у відновних і невідновних умовах), мас-спектрометрії (MS) та інших відповідних методів».
Аналітичні методи
Аналіз |
Методи |
Молекулярна вага |
LC-MS / Рідинна хроматографія/Електророзпилювальна мас-спектрометрія (LC/ES-MS) нативних, відновлених, N-деглікозильованих білків або субодиниць |
Аналітичні процедури
Інтактна молекулярна маса:
- Виконання РХ-МС на нативному зразку в отриманому вигляді.
- LC-MS аналіз даних.
Знижена молекулярна маса:
- Обробка зразка білка відповідним відновником;
- Виконання РХ-МС на відновленому білку;
- LC-MS аналіз даних.
N-деглікозильована молекулярна маса:
- Видалення N-гліканів відповідним ферментом;
- Виконання РХ-МС на N-деглікозильованому білку;
- LC-MS аналіз даних.
Знижена та N-деглікозильована молекулярна маса:
- Обробка зразка білка відповідним відновником;
- Видалення N-гліканів відповідним ферментом;
- Виконання РХ-МС на відновленому та N-деглікозильованому білку;
- LC-MS аналіз даних.
Молекулярна маса субодиниці білка:
- Розщеплення субодиниці
- Виконання РХ-МС на білковій субодиниці
- РХ-МС аналіз даних