Дані карти пептидів за допомогою методу Жиднісної Хроматографії-Мас-Спектрометрії (LC-MS) нададуть велику кількість інформації про первинну та вищі структури природних та рекомбінаційних протеїнів, включаючи покриття амінокислотної послідовності, пост-трансляційні модифікації (ПТМ, наприклад, гликозування, окислення, деамідація), двозв'язкові зв'язки тощо.
Yaohai Bio-Pharma пропонує послуги аналізу карти пептидів вашого цільового протеїну за допомогою LC-MS, щоб прискорити ваші дослідження структури протеїну.
Ми брали участь у характеристиці структури протеїнів різних великочастинкових молекул, включаючи Рекомбінаційні Підодинкові Вакцини, Нанотіла/ВНН/Однодоменні Антитіла (sdAbs), Фрагменти Антитіл, Гормони/Пептиди, Цитокіни, Фактори Зростання (GF), Ензими, Колагени тощо.
Регуляторні вимоги для пептидного картирования
Указівка ICHQ6B рекомендує: «Вибране розщеплення продукту на дискретні пептиди виконується за допомогою відповідних ензимів або хімічних засобів, а отримані пептидні фрагменти аналізуються методом ВЕАХ або іншою відповідною аналітичною процедурою. Пептидні фрагменти, якщо це можливо, повинні бути ідентифіковані за допомогою таких методів, як аналіз амінокислотного складу, N-термінальне секвенування або мас-спектрометрія (МС). Пептидне картировання активної речовини або лікарського продукту (ЛП) за допомогою відповідно валідованих методів є методом, який часто використовується для підтвердження бажаної структури продукту при випуску партії».
Аналітичні методи
| Аналіз |
Методи |
| Картографія пептидів |
Протеазне розщеплення та жідкостна хроматографія-мас-спектрометрія (ЖХ-МС) |
Аналітична процедура
1. Редукція та алкиляція
Метою є зменшення дисульфідних мостиків та блокування утвореного вільного тиолу. Зменшення дисульфідних мостиків допомагає відкриттю структури білка, що робить протеолітичний розщеплення ефективнішим. Цей крок також розриває мостики між ланцюгами у випадку багатоланцюгових білків, які мають дисульфідні мостики, що поєднують ланцюги (наприклад, монокlonальні антитіла, mAbs).
2. Розщеплення білка за допомогою ензимів
Метою є розщеплення білка на пептиди. Ми вибрали ензими на основі теоретичної послідовності білка та знань про теоретичне розщеплення білка ензимами. Вибір ензимів таким чином повинен призвести до найкращого аналізу карти пептидів.
3. Аналіз розщеплених пептидів Використання онлайн-оберненої фази Високоекфективної Жиднопhaсової Хроматографії з Ультрафіолетовим (UV) і Електроспрей-Мас-Спектрометричним Детектуванням (LC/ES-MS).
Розділення пептидів за полярністю за допомогою LC (обернена фаза-LC)
Під час елювання пептида з колонки ЛХ, мас-спектрометр буде генерувати масову інформацію разом із інформацією про фрагмент-іони, що дозволяє нам визначати послідовність. Ми використовуємо цю інформацію про послідовність для підтвердження ідентичності пептида та отримання початкової інформації.
Ми також можемо отримувати інформацію про фрагментацію від пептидів, коли вони потрапляють до джерела мас-спектрометра з колонки ЛХ. Залежно від вимог досліду, це або селективний LC-MS/MS, або неселективний, що можна вважати формою тандемного МС.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
