Циркулярна mRNA (circRNA) широко використовується у дослідженні функцій генів або білків. При цьому вона популярна у розробці профілактичних та лікувальних біопродуктів, подібно до mRNA.
Yaohai Bio-Pharma створила комплекс технологій синтезу circRNA для забезпечення високоякісної РНК, такої як проектування та оптимізація послідовностей, транскрипція in vitro (IVT), циркуляризація, очищення та енкапсуляція у ліпідні наночастинки (LNP). Усі продукти випускаються за строгими стандартами контролю якості (QC).
У порівнянні з лінійним mRNA, циркулярна РНК (circRNA) є більш стабільною за структурою і є головним напрямком досліджень у сфері нуклеїнових ліків. Вона має широке застосування в різних галузях, незалежно від того, чи є circRNA кодуючою або некодуючою, включаючи профілактичні вакцини проти інфекційних хвороб, терапевтичні онкологічні вакцини, терапевтичні онкологічні препарати, терапію заміною белків, регенеративну медицину, клітинну та генетичну терапію (CGT), роль молекулярного губки та RNA-аптамери.
Процес | Опціональні послуги | Деталі послуги | Термін доставки (днів) |
проектування та оптимізація послідовності circRNA | Проектування та оптимізація кодуючих послідовностей | Оптимізація кодонів CDS | 1 |
Проектування та оптимізація некодуючих послідовностей | Проектування та оптимізація послідовностей інтронів та ексонів, гомологічних рукавів та спейсерів | 1-2 | |
Підготовка циркулярних плазмід | Синтез генів | Синтез гену (від третіх осіб) | 7-10 |
Усилування плазміди | Усилування плазміди | 2 | |
Екстракція плазміди | |||
Підготовка лінійної плазміди | Лінеаризація та очищення плазмідів | Лініаризація плазміди | 1 |
Очищення ДНК після лінійнування | |||
Транскрипція in vitro та циклізація | Транскрипція in vitro та циклізація | Реакції транскрипції in vitro та циклізації | 1-2 |
Деградація RNase R | |||
Оптимізація - необов'язкова | Склад Реакції, Оптимізація Часу | 2-5 | |
очищення circRNA | Традиційний Метод Очищення | Випадання хлоридом литію | 1 |
Очищення магнітними частинками | 1 | ||
Високочисте Очищення circRNA | Приготувальна Високопродуктивна Жидкісна Хроматографія (HPLC) | 1-2 | |
Обмін буфера | Ультрафільтрація | 1 | |
ліофілізація circRNA | Заповнення Вибірки | Наповнювач | 2-3 |
Ліофілізація | Передзаморожування | ||
Первинне сушіння (сублимація) | |||
Другорядне сушіння (дезорбція) | |||
енкапсуляція circRNA-LNP | Енкапсуляція у ЛНП | Попередня обробка матеріалу та рідини | 2 |
Змішування у мікрофлюїдному пристрої | |||
Обмін буфера | Тангенційна поточкова фільтрація | 1 | |
Стерилізувати | Фільтрація | ||
Контроль якості плазмідної ДНК | Концентрація/чистота | Ультрафіолетова (UV) спектрофотометрія | 1-2 |
Конформація плазміди | Електрофорез у агарозному гелі (AGE) | ||
Капілярна електрофореза (CE) - опціонально | |||
Ідентифікація плазмід | Ідентифікація обмежувального ензиму/AGE | ||
Контроль якості circRNA | Концентрація/чистота | Ультрафіолетова (UV) спектрофотометрія | - |
Чистота | Агарозна гелева електрофореза (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
Високопродуктивна рідинна хроматографія - опціонально | 1 | ||
Контроль якості circRNA-LNP | Ефективність енкапсуляції | Метод RiboGreen | 1 |
Розмір частинок | Динамічне світлорозсіяння (DLS) | 1 | |
Індекс полідисперсності | Динамічне світлорозсіяння (DLS) | 1 | |
Зета-потенціал | Динамічне світлорозсіяння (DLS) | 1 | |
Асай ефективності на основі клітин | Трансфекція клітин | Посадка клітин, трансфекція клітин | 4 |
Виявлення цільового белка | Флуоресцентне спостереження, западні блотинг/ЕЛІЗА | 1-3 |
Ми провели трансфекцію збільшеної зеленою флуоресцентною білкової циркулярної РНК (eGFP circRNA), mCherry circRNA, луциферазної circRNA у клітинах 293T і виявили цільовий білок через флуоресцентний, світловий або кольоровий сигнал, западній блотинг (WB), ензимно-зв'язаною імунносорбційною асоціацією (ЕЛІЗА).
Асай ефективності циркулярних РНК проб за допомогою Yaohai Bio-Pharma