Кільцева мРНК (circRNA) широко використовується для вивчення функцій генів або білків. Тим часом він популярний у розробці профілактичних і терапевтичних біопрепаратів, подібних до мРНК.
Компанія Yaohai Bio-Pharma розробила набір технологій синтезу circRNA для забезпечення високоякісної РНК, наприклад дизайн та оптимізація послідовності, транскрипція in vitro (IVT), циркуляризація/циклізація, очищення та інкапсуляція ліпідних наночастинок (LNP). Вся продукція випускається відповідно до суворих стандартів контролю якості (QC).
Порівняно з лінійною мРНК кільцева РНК (circRNA) більш стабільна за структурою і є основною гарячою точкою в сучасних дослідженнях лікарських засобів нуклеїнових кислот. Він має широкий спектр застосування в різних сферах, як кодуюча circRNA, так і некодуюча circRNA, включаючи профілактичні вакцини для інфекційних захворювань, терапевтичні онкологічні вакцини, терапевтичні онкологічні препарати, білкову замісну терапію, регенеративну медицину, клітинну та генну терапію (CGT) роль молекулярної губки та аптамер РНК.
Процес | Додаткова послуга | Сервісні деталі | Термін доставки (день) |
Проектування та оптимізація послідовності circRNA | Проектування та оптимізація послідовностей кодування | Оптимізація кодону CDS | 1 |
Проектування та оптимізація некодуючих послідовностей | Послідовність інтронів і екзонів, дизайн і оптимізація гомологічного плеча і спейсера | 1-2 | |
Приготування циркулярної плазміди | Синтез генів | Генний синтез (сторонній) | 7-10 |
Ампліфікація плазмід | Ампліфікація плазмід | 2 | |
Екстракція плазміди | |||
Приготування лінеаризованої плазміди | Лінеаризація та очищення плазмід | Лінеаризація плазмід | 1 |
Лінеаризація Очищення ДНК | |||
Транскрипція та циклізація in vitro | Транскрипція та циклізація in vitro | Реакції транскрипції та циклізації in vitro | 1-2 |
РНКаза R травлення | |||
Оптимізація - необов'язкова | Склад реакції, оптимізація часу | 2-5 | |
очищення circRNA | Традиційний метод очищення | Осадження хлориду літію | 1 |
Очищення магнітними кульками | 1 | ||
Високочисте очищення circRNA | Препаративна високоефективна рідинна хроматографія (ВЕРХ) | 1-2 | |
Обмін буфером | Ультрафільтрація | 1 | |
ліофілізація circRNA | Зразок заповнення | Заповнення | 2-3 |
Ліофілізація | Попереднє заморожування | ||
Первинна сушка (сублімація) | |||
Вторинна сушка (десорбція) | |||
інкапсуляція circRNA-LNP | Інкапсуляція LNP | Попередня обробка матеріалу та рідини | 2 |
Мікрофлюїдний пристрій для змішування | |||
Обмін буфером | Фільтрація тангенціального потоку | 1 | |
стерилізований | Фільтрація | ||
Контроль якості плазмідної ДНК | Концентрація/чистота | Ультрафіолетова (УФ) спектрофотометрія | 1-2 |
Конформація плазміди | Електрофорез у агарозному гелі (AGE) | ||
Капілярний електрофорез (CE) - необов'язково | |||
Ідентифікація плазміди | Ідентифікація ферменту рестрикції/AGE | ||
Контроль якості circRNA | Концентрація/чистота | Ультрафіолетова (УФ) спектрофотометрія | - |
Чистота | Електрофорез у агарозному гелі (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-опціонально | 1 | ||
Контроль якості circRNA-LNP | Ефективність інкапсуляції | Метод RiboGreen | 1 |
Розмір частки | Динамічне розсіювання світла (DLS) | 1 | |
Індекс полідисперсності | Динамічне розсіювання світла (DLS) | 1 | |
Дзета-потенціал | Динамічне розсіювання світла (DLS) | 1 | |
Клітинний аналіз ефективності | Трансфекція клітин | Посів клітин, трансфекція клітин | 4 |
Виявлення цільового білка | Спостереження флуоресценції, Вестерн-блот/ІФА | 1-3 |
Ми трансфікували посилену circRNA зеленого флуоресцентного білка (eGFP circRNA), circRNA mCherry, circRNA люциферази в клітини 293T і виявили цільовий білок за допомогою флуоресценції, люмінесцентного або кольорового сигналу, вестерн-блот (WB), твердофазного імуноферментного аналізу (ELISA).
Клітинний аналіз ефективності зразків circRNA Yaohai Bio-Pharma