5'-кінець кепування є істотною модифікацією мРНК. мРНК із кеп-структурами, особливо структури Cap1, полегшують мРНК уникнення вроджених імунних відповідей in vivo, що призводить до ефективної трансляції білка.
Ферментативне кепування (двоетапний метод) є звичайним методом кепування мРНК, подібним до процесу кепування в еукаріотичних організмах. Під дією ряду ферментів 7-метилгуанін (m7G) з’єднується з 5’-кінцем мРНК через 5’-5’ трифосфатний зв’язок і зазнає модифікації метилювання з утворенням кеп-структури Cap 1 (m7GpppN).
Схема формування природної структури шапки
Перебіг реакції ферментативного блокування виглядає наступним чином:
Лінеаризована плазмідна ДНК використовується як матриця для транскрипції in vitro (IVT) у присутності полімерази Т7, а мРНК із 5'-кінцевою структурою утворюється після одноетапного очищення з використанням кеппуючого ферменту осповакцини та 2'-O -метилтрансфераза.
Деталі послуг
Додаткова послуга |
Сервісні деталі |
Період доставки (день) |
мРНК ферментативний кепінг |
Реакція ферментативного блокування |
1 |
Оптимізація реакції обмеження - необов'язкова |
Проектування та оптимізація компонентів реакції |
3 ~ 7 |
Наші особливості
- Проектування та оптимізація компонента реакції укупорки
Компонент реакції блокування оптимізується, і виробництво транскрипту мРНК значно збільшується.
- Перевірка експресії in vitro
Закрита мРНК трансфікується в клітини 293T, і можна виявити експресію цільового білка.
Завдяки суворому контролю експериментального середовища та витратних матеріалів RNaseson ефективно запобігається деградації мРНК.
Вивчення проблеми
Платформа мРНК компанії Yaohai Bio-Pharma створила ідеальний процес реакції блокування.
Для мРНК eGFP, попереднього продукту мРНК, отриманого за допомогою ферментативного кепування, сигнал флуоресценції eGFP (зелена флуоресценція) на високому рівні можна спостерігати після трансфекції клітин 293T протягом 24 годин, що виявляється за допомогою Вестерн-блот (ВБ), демонструючи, що Зелений флуоресцентний білок, посилений цільовим білком (eGFP), може бути ефективно експресований in vitro.
Експресія ферментативно закритої мРНК eGFP у клітині 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
