Щодо партійної підготовки преCURSORів RNA, поширеним методом є транскрипція in vitro (IVT). Реакція IVT використовує лінійний плазмідний DNA, що містить промотор T7, як шаблон і синтезує преCURSOR RNA з нуклеозидними трифосфатами (NTPs) як субстратом у наявності полімерази RNA T7.
Методи циклізації in vitro включають хімічне об'єднання, ензимне об'єднання та метод переставленого інтрон-екзону (PIE). Хімічне об'єднання та ензимне об'єднання придатні для циклізації коротших РНК. Коли фрагмент більший за 100 нт, швидкість циклізації значно зменшуватиметься. Насупроте, метод нуклеази, що базується на системі PIE, може досягти циклізації послідовностей довжиною 8 кб.
Під катализацією гуанозинтрифосфату (GTP) структура PIE піддається циклізації екстраінтронних послідовностей. У kombінації з раціональною стратегією підвищення швидкості циклізації, Yaohai Bio-Pharma може досягти циклізації послідовностей довжиною до 4 кб з ефективністю більше 80%.
Циклізаційна реакція РНК in vitro протікає наступним чином:
Предшественник РНК синтезується шляхом транскрипції in vitro, а компонент PIE завершує самоперемикання під катализацією GTP, щоб утворити circRNA.
Деталі послуг
| Процес |
Деталі послуги |
Термін доставки (робочий день) |
| Транскрипція in vitro та циркуляція |
Підтвердження реакційної системи |
1-2 |
| Реакції транскрипції in vitro та циклізації |
| Деградація RNase R |
| Оптимізація реакції |
Склад Реакції, Оптимізація Часу |
2-5 |
Наші особливості
- Строгий проект тесту та його оптимізація
Можлива циклізація РНК до 4 кб.
- Висока ефективність циклізації
За допомогою раціональної стратегії оптимізації послідовності можна досягти ступеня циклізації більше 80%.
Шляхом строгого контролю RNases у експериментальному середовищі та витратних матеріалах ефективно запобігається деградації РНК.
Вивчення випадку
Циклізація та обогащення circRNA in vitro
На основі системи PIE компанія Yaohai Bio-Pharma оптимізувала послідовність circRNA, досягаючи ступінь циклізації більше 80% за допомогою агарового гелевого електрофорезу (AGE). Використовуючи RNase R для обогащення circRNA, результати електрофорезу E-gel показують, що лінійний РНК-предшествник є розщепленим, і після подальшої очищення, багато з порублених circRNA можна вилучити. Розчин для очищення було розроблено самостійно компанією Yaohai Bio-Pharma.
Циркуляція та обогащення circRNA in vitro
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
