Основа енкапсуляції - це проектування та розробка системи доставки. Хорошо спроектована система доставки дозволяє молекулам circRNA потрапляти до організму без знищення ферментами РНК і потім ефективно доставлятися до цільової локації, пересуватися через клітинну мембрану та вивільшуватися у клітинному середовищі.
Ліпідні наночастинки (LNP) є найкращою системою доставки, яка доступна, з перевагами у капсулюванні, експресії in vivo та безпечності in vivo порівняно з іншими системами доставки. LNP з фрагментами нуклеїнової кислоти легко заглинаються в клітини і утворюють інтерклітинні тіла. Після входження до клітини, кисла середовище інтерклітинного тіла протонує і позитивно заряджує головку йонізованого ліпуїду, що спричиняє їх сплавлення з внутрішньою мембраною інтерклітинного тіла і вивільнення цільової нуклеїнової кислоти в клітину для дії.
Послуга circRNA компанії Yaohai Bio-Pharma постійно вдосконалюється і може надати послугу капсулювання circRNA-LNP для оптимізації відповідних ключових параметрів процесу та покращення стабільності та повторюваності виробництва ліків circRNA.
Процес | Деталі послуги | Термін доставки (днів) | Результати виконання |
енкапсуляція circRNA-LNP | Попередня обробка матеріалу та рідини | 2 | продукт лікарського засобу circRNA-LNP (DP) |
Змішування у мікрофлюїдному пристрої | |||
Тангенційна поточкова фільтрація | 1 | ||
Стерилізаційне фільтрування | |||
контроль якості circRNA-LNP | Ефективність енкапсуляції | 1 | Доповідь про випробування |
Розмір частинок та індекс полідисперсності | |||
Зета-потенціал |
Швидкий синтез, висока ефективність РД та попередньо оптимізовані розв'язки;
Відношення енкапсуляції може досягати більше 90%;
Розмір ліпідних наночастинок можна контролювати, змінюючи швидкість і стосунок вливання рідини;
продукти circRNA-LNP перевіряються за допомогою вивчення вираження в клітинках in vitro і можуть ефективно виражати цільовий белок.
Приготувані проби LNP-eGFP circRNA та їх різні дози (1 мкг, 2 мкг і 4 мкг) безпосередньо трансфекціюються до клітин 293T для перевірки, чи вони можуть виражати цільовий белок. Через 48 годин після трансфекції можна спостерігати чіткий флуоресцентний сигнал, а також існує ефект дозалового наросту інтенсивності флуоресценції.
Lipo-circ_eGFP, що складається з ліпозом і необгорнутого eGFP circRNA, використовується як контроль.