Зайнятість сайту N-гликозилування - це фізіологічна ознака глікопротеїнів і головним чином виробляє N-глікан. Сервіс аналізу зайнятості сайту N-гликозилування від Yaohai Bio-Pharma проводиться шляхом дижестії, вивільнення, збагачення та аналізу за допомогою Жиднопhaзової Хроматографії-Електроспрейного Іонізаційного Мас-Спектрометрa-Мас-Спектрометрa (LC-ESI-MS/MS).
Ми брали участь у характеристиці структури протеїнів різних великочастинкових молекул, включаючи Рекомбінаційні Підодинкові Вакцини, Нанотіла/ВНН/Однодоменні Антитіла (sdAbs), Фрагменти Антитіл, Гормони/Пептиди, Цитокіни, Фактори Зростання (GF), Ензими, Колагени тощо.
Регуляторні вимоги для зайнятості сайту N-гликозилування
За угодою ICH Q6B, «для глікопротеїнів визначається вміст углеводів (нейтральних цукрів, аміноцукрів і сіалових кислот). Крім того, аналізується структура ланцюгів углеводів, олигосахаридний шаблон (профіль антен) та місце гликозиляції поліпептидного ланцюга настільки повністю, наскільки це можливо».
Аналітичний метод
| Аналіз |
Методи |
| Зайнятість сайту N-глікозилізації |
LC-MS після деглікозилазної та протеазної деградації |
Процедур
1. Деградація белка для отримання малих пептидних фрагментів.
2. Вивільнення N-гліканів за допомогою ендоглікосидази H або PNGase F. Ендоглікосидаза H розрізає зв'язок між двома молекулами GlcNAc у ядрі N-зв'язаних гліканів, тоді як PNGase F є гlicoамідазою, яка розрізає зв'язок між GlcNAc і Asn, вивільшуючи весь цукровий ланцюг і перетворюючи Asn у Asp з збільшенням маси на 1-Da.
3. Збагачення N-глікопептидів за допомогою HILIC (Хроматографія у водостійкому режимі)
4. Аналіз зайнятості місць N-зв'язаної гликозиляції за допомогою LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
